赵云峰，梁栋，张梅，吴学玲

    支气管哮喘(以下简称哮喘)主要是在过敏原刺激下，Th2免疫反应增强、Th1免疫反应减弱所致的复杂病理过程，嗜酸性粒细胞、T 细胞及其细胞因子在哮喘整个病理过程中起着重要的作用。近年来研究显示：细胞因子白细胞介素 27(IL-27)可以增强 Th1免疫反应、减弱 Th2免疫反应[1]；抑制过度的炎症反应[2]。IL-27 在哮喘的病理过程中扮演着重要角色。本研究应用卵白蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型，在OVA 致敏后的第 28～30 天，连续 3 d 每天滴鼻给予 IL-27，观察小鼠肺组织病理学改变、计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞数量，测定 BALF 中细胞因子 IL-4、IFN-γ 浓度，测定肺组织 T-bet mRNA表达量，旨在研究 IL-27 对哮喘小鼠气道炎症的影响及可能机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂及仪器 卵白蛋白(ovalbumin，OVA，V 级)购自美国 Sigma公司；氢氧化铝粉购自上海浦山化工公司；小鼠 IL-4、IFN-γ ELISA试剂盒购自深圳晶美科技有限公司；小鼠 T-bet 及β-actin 检测引物由上海博亚生物工程有限公司合成；逆转录酶、Taq 酶及缓冲液购自美国 Promega公司；重组IL-27 由日本 Hyogo 大学 Yoshimoto教授惠赠。光学显微镜由日本 Olympus公司制造；低温冰箱由日本 Sanyo公司制造；离心机由美国Beckman公司制造。

    1.1.2 实验动物分组和模型制备 选择 5～6周龄，清洁级健康 BALB/c 雌性小鼠 24只，重量12～16 g，东南大学医学院实验动物中心提供。动物房温度波动于20～24 ℃，湿度 70%，普通光照，自由饮水，喂食小鼠专用饲料。24只小鼠按随机数字法随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组，每组8只。①哮喘小鼠模型的建立：每只小鼠于第 1、14、21 天腹腔注射 0.1% OVA 0.1ml、100 g/L氢氧化铝 0.2ml 进行致敏，第 28～30 天连续 3 d用 3 g/L 戊巴比妥钠 0.3ml 腹腔注射麻醉小鼠后，1% OVA 溶液 50 μl 滴鼻激发；②生理盐水组小鼠：方法和步骤同上，采用生理盐水代替 0.1%OVA；③IL-27组小鼠：在OVA 致敏的第 28～30 天，IL-27组小鼠分别给予 1 μg IL-27(溶于50 μl PBS 中)滴鼻[1]，其余处理同哮喘小鼠模型的建立 ......