林克勤，易文，褚嘉祐

    杂交瘤研究中染色体分析的方法及其意义

    林克勤，易文，褚嘉祐

    【摘要】

    目的探讨细胞同步化染色体高分辨技术检测杂交瘤细胞染色体的可行性。

    方法选择小鼠骨髓瘤 SP-2/O 细胞株、人淋巴母细胞CKM-8 细胞株、人骨髓瘤 KM 细胞株、抗小鼠胰腺癌鼠-鼠杂交瘤细胞株，体外培养 24 ～ 48 h。对 4 种细胞株分别进行同步化处理，加入 5-氟脱氧尿嘧啶核苷和尿嘧啶培养16 ～ 18 h 后，加入 5-溴脱氧尿嘧啶核苷，并在收集细胞前加入秋水酰胺；收集细胞进行离心、低渗处理、固定、再固定，制备染色体滴片，应用胰蛋白酶-Giemsa 染液对染色体进行 G 显带处理。每例标本以 30 个以上分裂象做众数分析，按照《人类细胞遗传学国际命名体制》(ISCN 1978)对细胞株染色体进行 G 显带分析。

    结果4 种细胞株的染色体均较长、分散良好、形态较好。SP-2/O 细胞株、CKM-8 细胞株、KM 细胞株、抗小鼠胰腺癌鼠-鼠杂交瘤细胞株的染色体数目分别为 63、46、42、105，其中抗小鼠胰腺癌鼠-鼠杂交瘤细胞染色体数目接近小鼠淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞染色体数的总和，且多数为端着丝点染色体。

    结论细胞同步化染色体高分辨技术检测杂交瘤细胞染色体具有良好的效果。

    【关键词】杂交瘤； 细胞遗传学分析； 染色体； 动物实验

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(5):367-370

    杂交瘤是通过细胞融合技术[1]，将具有分泌抗体能力的致敏 B 淋巴细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合成杂交细胞，可在体外连续繁殖并能产生性质专一的单克隆抗体。但杂交瘤细胞在培养过程中，编码抗体的染色体容易丢失，因此对杂交瘤细胞染色体的鉴定就显得尤为必要。在杂交瘤及单抗研究中，细胞遗传分析技术在鉴定杂交瘤[2]、观察细胞株突变、探索抗体特性等方面均具有重要价值，但杂交瘤细胞的异质性往往使得常规染色体制备技术无法获得满意的标本用于分析。为此，我们尝试将改进的细胞同步化染色体高分辨技术引入杂交瘤领域，以探讨其检测杂交瘤细胞染色体的可行性。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株 小鼠骨髓瘤 SP-2/O 细胞株由中国药品生物制品检定所惠赠；人淋巴母细胞CKM-8 细胞株为本研究所遗传室保存；人骨髓瘤KM 细胞株为本研究所自建；抗小鼠胰腺癌鼠-鼠杂交瘤细胞株由云南省肿瘤医院肿瘤研究所免疫研究室惠赠 ......