尹磊淼，宋凯，张庆华，魏颖，王宇，徐玉东，杨永清

    ·论著·

    大鼠钙结合蛋白S100A9基因克隆、表达及纯化研究

    尹磊淼，宋凯，张庆华，魏颖，王宇，徐玉东，杨永清

    目的构建大鼠钙结合蛋白 S100A9 的原核表达质粒并获得纯化重组蛋白。

    钙结合蛋白质类； 遗传载体； 基因表达；自身免疫性疾病

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(6):405-409

    S100A9 是钙结合蛋白 S100 家族重要成员之一，功能作用广泛，可高选择性、高亲和性结合Ca2+、Zn2+等离子，具备细胞外和细胞内调节活性，参与细胞迁移，花生四烯酸代谢，骨髓细胞成熟等生物学过程[1]。S100A9 和多种免疫性炎症疾病密切相关，如支气管哮喘、系统性红斑狼疮、儿童幼年特发性关节炎、大细胞性动脉炎、多发性硬化等。我们课题组利用基因表达序列分析技术(serial analysis of gene expression，SAGE)发现 S100A9 是支气管哮喘特异性高表达标签之一[2-3]，而针刺治疗后表达降低，故认为 S100A9 可能参与针刺抗哮喘固醇合成和免疫调节等生物过程[4]。

    本研究克隆构建 pET-32a-S100A9 原核表达载体，转化至 E.coli BL21(DE3) 受体菌，利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside，IPTG)和不同温度条件诱导表达重组蛋白并采用亲和层析法进行蛋白纯化，从而为进一步观察S100A9 蛋白生物学功能提供重要研究基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要仪器 P100 PCR 仪为美国 Bio-Rad公司产品；Tanon Gis-2010 型数码凝胶图像处理系统、Tanon EPS300 电泳系统为上海天能科技有限公司产品；THZ-03M1 空气浴恒温振荡器为上海申能博彩生物科技有限公司产品；LRH-150 生化培养箱为上海一恒科学仪器有限公司产品；超净工作台为上海一恒科学仪器有限公司产品；Soniprep 150超声破碎仪为日本 Sanyo 公司产品；离心超滤管为美国 Millipore 公司产品；高速落地离心机为美国 Beckman Coulter 公司产品。

    1.1.2 主要试剂 原核表达载体质粒 pET32a购自美国 Novagen 公司；E.coli BL21(DE3) 受体菌购自美国 Invitrogen 公司；离心柱型 PCR 产物割胶回收纯化试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司；离心柱型质粒小量制备试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司；胰蛋白胨和酵母提取物购自英国Oxoid 公司；100 mg/ml 氨苄青霉素、IPTG 均购自天根生化科技有限公司；Chelating Sepharose Fast Flow 纯化柱购自美国 GE healthcare 公司 ......