刘辉，朱平

    表达特定免疫球蛋白可变区抗原的人B细胞系建立和其生物学特征

    刘辉，朱平

    【摘要】

    【关键词】淋巴瘤，B 细胞； 免疫球蛋白类； 疫苗

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(6):410-414

    淋巴瘤治疗是目前肿瘤治疗的难题之一，虽然目前用放化疗取得了一定效果，但还不能彻底治愈这类肿瘤。近年发展的过继性免疫治疗有望开辟新的肿瘤治疗途径。在淋巴瘤的过继免疫治疗中，可以用永生化人 B 细胞系作为抗原刺激物，激活患者的淋巴细胞生成特异性的细胞毒 T 细胞(CTL)。以往 B 淋巴瘤研究发现，B 淋巴瘤的表面免疫球蛋白抗原和正常 B 淋巴细胞类似，同样可以按照 Lefranc 提供的方法分类。这种分类是根据 B 细胞表面免疫球蛋白框架区的序列同源性，将 B 细胞或者淋巴瘤细胞分为 IgHV1 ～ IgHV7七个家族[1]，每一种肿瘤 B 细胞也分属于其中的一个家族。淋巴瘤中 IgHV3 家族最大，约占淋巴瘤的 30% 左右。用同一家族的 B 细胞作为抗原，刺激培养中的淋巴细胞，可以诱导相应的 CTL 产生。此外，CTL 在识别 B 细胞表面免疫球蛋白抗原时，必须具有同样类型的人白细胞抗原(HLA)。在 HLA 类型中，HLA-A*0201 是在中国人群中最常见的类型之一。尽管目前国内外已建立了一些B 细胞肿瘤细胞系[2-3]，但是迄今未见报道有同时表达 HLA-A*0201 和 IgHV3 家族的人 B 细胞系。本研究中我们建立一株 HLA-A*0201 和IgHV3 都表达的永生化 B 细胞系，并对其相应的生物学特征进行鉴定。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 细胞标本 取 29 例健康志愿者外周血建立永生化细胞系，标本由北大第一医院杨艳玲教授惠赠。要求供者既往无疾病史和手术史，并签署了知情同意书。

    1.1.2 主要试剂 RPMI 1640 培养基和胎牛血清购自美国 Hyclone 公司；DNA 提取试剂盒购自美国 Axygene bioscience 公司；PCR 试剂盒购自天根生化科技北京有限公司；HLA SSP 位点分型试剂盒购自美国 Pel Freez Dynal 公司；IgHV1 ～ IgHV7家族 PCR 引物由美国 Invitrogen 公司合成；各种CD 分子抗体和 T 细胞受体(TCR)均为美国 BD公司产品；青霉素/链霉素双抗试剂购自北京索莱宝科技有限公司；其他化学试剂为国产分析纯；B 淋巴细胞培养体系为在 RPMI 1640 培养基中加入热灭活的 10% 胎牛血清、5 mmol/L 谷胺酰胺、1.6% Hepes、100 U/ml 青霉素、100 μg/ml 链霉素 ......