马雪梅, 白志刚, 张忠涛, 屈翔, 赵晓牧

    紫杉醇对乳腺癌细胞紫杉醇耐药基因Txr1表达的影响

    马雪梅, 白志刚, 张忠涛, 屈翔, 赵晓牧

    【摘要】

    目的应用人乳腺癌细胞制备紫杉醇耐药细胞模型，探讨紫杉醇对乳腺癌细胞中紫杉醇耐药基因 Txr1 表达的影响。

    方法比较紫杉醇预处理前后不同浓度紫杉醇对乳腺癌细胞的增殖和细胞周期的改变；用 RT-PCR 方法检测 Txr1、TSP1 和 MDR1 的 mRNA 水平变化；用 Western blot 检测 Txr1 和 TSP1 的蛋白质水平的变化。

    结果紫杉醇预处理后，紫杉醇抑制乳腺癌细胞(MCF-7 细胞)的生长作用明显减弱。流式细胞仪分析表明，MCF-7 细胞经过紫杉醇作用后被阻滞于细胞周期的 G2M 期。紫杉醇作用于 MCF-7 细胞后，Txr1 的 mRNA 水平上调，TSP1下调，而 MDR1 表达无明显改变。类似的结果在蛋白的水平被 Western blot 进一步证实。

    结论紫杉醇可能通过 Txr1 上调抑制 TSP1 的表达从而诱导肿瘤细胞的耐药性。

    【关键词】乳腺肿瘤； 紫杉醇； 抗药性，肿瘤； 凝血酶敏感蛋白 1

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(6):429-433

    乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，并且其发病率呈逐年上升趋势。近年来，随着乳腺癌诊断手段的不断提高，治疗方法的不断完善，乳腺癌的死亡率呈现出下降的趋势[1]。在临床上乳腺癌的治疗主要采用手术、化疗、放疗和内分泌治疗相结合的综合治疗手段，并取得了显著的治疗效果，其中新型抗癌药物的出现起到重要的作用[2]。紫杉类药物是乳腺癌化疗的主要药物之一，但其存在的耐药性是当前亟需解决的问题。紫杉醇耐药的机制复杂，现有的耐药机制学说尚不能很好解释其相关机制。新耐药基因-紫杉醇耐药基因(taxol-resistance gene 1，Txr1)的发现对研究紫杉醇耐药机制提供了新的思路，但其在治疗乳腺癌中的耐药作用尚未见报道。我们拟应用乳腺癌细胞系 MCF-7，制备出对紫杉醇耐药细胞模型，研究 Txr1 的表达与MCF-7 细胞产生紫杉醇耐药的关系。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    紫杉醇购自协和药厂；TRIzol、Lipofectamine 2000 购自美国 Invitrogen 公司；BCA 蛋白定量试剂盒购自美国 Pierce 公司；噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、溴化丙锭(PI)购自美国 Sigma公司；MMLV 逆转录酶购自美国 Promega 公司；Txr1 兔抗人多克隆抗体由斯坦福大学 Cohen 教授赠送；TSP1 兔抗人多克隆抗体(BA2130)、β-actin鼠抗人单克隆抗体购自美国 Sigma 公司；用含10% 的小牛血清(Gibco)的 DMEM 培养基培养的人乳腺癌细胞 MCF-7(ATCC)购自美国 Gibco公司 ......