巫晔翔，司书毅，蒋建东，唐巍然

    在 20 世纪 70年代曾有学者发现一群 T 细胞具有免疫抑制功能，但直至 1995年Sakaguchi等[1]发现 CD4+CD25+ 为调节性 T 细胞的表面标志后，人们才开始对调节性 T 细胞的分化、发育和功能进行深入的研究，并发现转录因子FOXP3在调节性 T 细胞中的作用，开始关注调节性 T 细胞在维持机体免疫耐受，防止自身免疫性疾病的发生，抗移植物排斥以及肿瘤免疫中的重要作用。

    FOXP3是一种具有叉头螺旋(forkhead/winged helix)结构的转录调节因子[2]。它的基因编码产物是一个分子量为48 kD 的 Scurfin 蛋白质。它主要表达于 CD4+/CD25+ 调节性 T 细胞，是决定调节性 T 细胞免疫抑制功能的关键基因。尽管有关FOXP3的信号传导途径还有待进一步研究，但Hori 等的研究表明FOXP3能够特异性地表达于CD4+ 的调节性 T 细胞，CD4+/CD25- 细胞在转染FOXP3基因后能够赋予这些细胞具有调节性T 细胞的表型，具有高表达水平的 CD25、CD103、GITR、CTLA4 和低水平表达的细胞因子[3-5]，是控制调节性 T 细胞发生分化的关键性转录因子。转染FOXP3基因的 CD4+/CD25– 细胞在体外通过细胞间接触可发挥其免疫抑制功能，在体内能够抑制自身免疫性疾病和炎症性疾病的发生。FOXP3还能够抑制自身反应性 T 细胞功能，FOXP3功能缺陷会导致许多自身免疫病的出现如：糖尿病、湿疹、变态反应性疾病、淋巴细胞增生等。而FOXP3功能的异常增强也会导致病理性的免疫抑制和肿瘤疾病的发生[6-7]。

    这些研究结果表明调节性 T 细胞中的转录因子FOXP3不仅有望成为治疗自身免疫病，变态反应性疾病和解决移植排斥反应难题的作用靶点，而且也可能成为肿瘤免疫学治疗中的理想治疗靶点之一。尽管已有瞬时表达FOXP3细胞用于研究其功能的报道，但有关建立以FOXP3为靶点永久、稳定细胞系用于高通量筛选免疫抑制剂的细胞模型，尚未见文献报道。为此，我们将转录调节因子FOXP3基因启动子克隆到 pGeneBLAzer-TOPO载体中并与报告子 β-内酰胺酶相偶联，建立以FOXP3为靶点的免疫抑制剂药物筛选模型。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 质粒，菌株和细胞株：真核细胞表达载体pGeneBLAzer-TOPO 为美国 Invitrogen 公司产品；大肠杆菌E.coliDH5α 为大连宝生物工程公司产品；Jurkat 细胞株为中国医学科学院基础医学研究所提供 ......