王丽非，朱元军，王松梅，杜郁，余腾斐，王丽，洪斌

    干扰素(interferon，IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等活性的细胞因子，能通过多种机制影响肿瘤细胞功能，促进免疫细胞的活性[1]。干扰素是一个大的基因家族，可分为3 型，主要包括 IFNα、IFNβ 和 IFNγ[2]。IFNβ 主要用于病毒性疾病、恶性肿瘤和自身免疫性疾病的治疗[3]。1993年，美国 FDA 批准了 Chiron 公司生产的IFNβ-1b 上市销售，其商品名为Betaseron，用于治疗多发性硬化症、神经系统疾病。日本也批准了静脉注射的 IFNβ 用于治疗慢性乙型或丙型肝炎[4]。

    尽管如干扰素、集落刺激因子等一些细胞因子已被开发成蛋白药物用于临床，但作为科研用试剂的细胞因子的开发在我国几乎是一片空白，高价进口和受制于西方生物技术公司成为细胞因子来源的主要现状。本工作在国家科技支撑计划——“科研用细胞因子试剂平台的完善和应用研究”的支持下，采用高效的宿主系统和载体表达标签化细胞因子——组氨酸标签人 β 干扰素(HIS-IFNβ)，实现了可溶性表达，并利用 Ni sepharose 亲和层析的方法，分离得到高纯度的 HIS-IFNβ，并进行了生物学活性的检测，为科研用标签化细胞因子试剂的研制奠定了基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料与仪器

    1.1.1 菌株、细胞株、病毒株和质粒 大肠杆菌E.coliTG1、E.coliBL21(DE3) 为本实验室保存；人羊膜细胞(Wish细胞)购自中国科学院上海细胞中心；水泡性口膜炎病毒(VSV)为本研究所保存；质粒载体 pGEM-T 购自美国 Promega 公司；质粒载体 pET-16b 购自美国 Novogen 公司。

    1.1.2 培养基 大肠杆菌培养基 LB 的配制参见分子克隆操作指南[5]；氨苄青霉素在 LB 培养基中使用浓度为100 μg/ml；Wish 细胞所用 MEM 培养基购自美国 Thermo scientific 公司。

    1.1.3 工具酶和生化试剂 限制性内切酶、T4 DNA 连接酶等均购自日本 TaKaRa 公司；PfuDNA 聚合酶购自上海生物工程公司。TA 克隆试剂盒，购自美国 Promega 公司；UNIQ-10 柱式 DNA胶回收试剂盒，购自上海生物工程公司。人 β 干扰素抗体和组氨酸标签抗体购自美国 R&D 公司；人 β 干扰素标准品购自中国药品生物制品检定所。

    1.1.4 仪器 miniCycleTMPTC-200 型 PCR 仪为美国 MJ Research 公司产品；SEMI-DRY TRANSFER 转膜仪为美国 Bio-Rad 公司产品；?KTA Explorer 系统为美国 GE Healthcare 公司产品；SHIMADZU-20A 型高效液相色谱仪为日本岛津公司产品；C8 反相柱 ZORBAX 300SB-C8为美国 Agilent 公司产品 ......