陈建国，王金兵，陆建华，张永辉，陈陶阳

    启东是我国的肝癌高发区，自 1972年以来，启东现场采用流行病学、临床及实验室等方法，对肝癌的病因、肝癌的诊断和肝癌的治疗等进行了广泛的研究[1]。通过采集并分析大量血样、尿样及其他标本，为肝癌的实验研究提供了医学和生物学证据。20 世纪 80年代末尝试建立生物标本库，为启东肝癌研究的持续和深入发展增加了竞争力。现把我所生物样本库的建立与应用做一总结。

    1 样本的种类及保留方法

    1.1 样本种类

    1.1.1 血样 ①血清：未抗凝的血标本经离心后获得，即血浆中除去纤维蛋白后的淡黄色胶状液体。20 世纪 80年代用注射器采集外周静脉血 5 ml 注入玻璃试管；90年代逐步采用真空采血管采集外周静脉血 5～10 ml，室温直立静置 30min(现场采血室温放置时间控制在 6 h 以内)，室温，1000×g 水平离心 15min。用一次性移液管小心吸取上层血清，根据实验需要的量分装到 1.5 ml 的冻存管后分别保存。②血浆：抗凝的血标本经离心后获得，即血液中除血细胞、血小板之外的部分。抗凝剂可用肝素、EDTA-K3或EDTA-K2等。采用不同规格(6～10 ml)的真空采血管采集外周静脉血，立即轻轻颠倒震摇 8～10 次，室温直立静置 30min(现场采血室温放置时间控制在 6 h 以内)。实验室分离前再次轻轻颠倒混匀 8～10 次，室温水平离心1500×g，20min。用一次性移液管依次小心吸取上层血浆，根据实验需要量分装到 1.5 ml 的冻存管。③白细胞：全血中的一种细胞成分。抗凝采血管离心分离后，上层为血浆、中间层即为白细胞(WBC)(下层为红细胞)。–80℃保存。

    1.1.2 尿样 分为晨尿、夜尿或 24 h 尿样，根据项目设计和需要，选用不同规格的采样容器分别采集尿液，并记录总量，做常规检测及(或)特殊检查。每一人份的尿样以Fisher 锥形管保留，选用不同规格的保留管，可作双份备份，例如 15 ml×2 管，50 ml×2 管，等。–25℃保存。

    1.1.3 组织标本 ①石蜡组织：将手术切除的肝癌及癌周肝组织按病理组织切片常规固定、脱水、透明、浸蜡和包埋，一般常温下可以保存。②新鲜组织：在完成组织学诊断后，将剩余的肝癌及癌周肝组织根据实验用量，分成若干份，液氮或 –80℃保存。

    1.2 保留管的选择

    1.2.1 塑料管 20 世纪 80年代，限于当时的条件，采用Ф 4mm 的塑料管吸取血清 ......