富岩，韩国，杨小楠，富俞淞，邢静，胡俊霞，陈颖，云文琦，于在林

    两种具长效性重组人血清白蛋白/干扰素α融合蛋白表达工程菌的构建及融合蛋白的理化特性研究

    富岩，韩国，杨小楠，富俞淞，邢静，胡俊霞，陈颖，云文琦，于在林

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2011, 6(2):84-95

    目的对两种长效干扰素 α 融合蛋白原料药的理化特性多项指标开展分析和进行比较。

    方法利用基因工程技术分别构建了可高效表达重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白(rHSA/IFNα2a)或重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白(rHSA/IFNα2b)的毕赤酵母工程菌。融合蛋白直接分泌到组分简单的无机盐培养基中，并经特别建立的高效分离纯化工艺进行纯化，随后对两个融合蛋白进行详尽的理化特性分析。

    结果获得的融合蛋白纯度在 98% 以上；N 端前 15 个氨基酸序列与理论序列相同；质谱分子量分别为 85640.8 D和85781.5 D；圆二色光谱分析比对蛋白空间构象未变；等电点 pI 约在 5.1 左右；为非糖基化蛋白；紫外光谱呈典型蛋白质光谱；自由巯基含量测定值为 1.4；肽图批次间一致；肽质量指纹图谱可匹配分别达 83% 和 82%；对制备的2 个融合蛋白原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源性 DNA、甲醇和甘油的残留量检测符合标准要求；融合蛋白的免疫学鉴别为阳性；体外细胞生物比活性约为 2.5 ×105IU/mg，并且 2 个融合蛋白生物比活性测定值无不同，由此，获得了符合临床用药标准的原料药。

    结论研究所获得的结果可以作为指导《注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2a 融合蛋白》和《注射用重组人血清白蛋白/干扰素 α2b 融合蛋白》2 个新药的原料药生产质量标准的建立和检定方法的确定。

    干扰素 α； 血清白蛋白； 毕赤酵母； 重组融合蛋白质类

    人干扰素(human interferon，hIFN)是一类重要的细胞因子，它是机体受到病毒感染时，免疫细胞通过对侵染源做出应答反应而产生的一组结构类似、功能相近的低分子糖蛋白。干扰素 α 属于I 类干扰素，主要有干扰素 α2a 和干扰素 α2b，均由白细胞产生，并且干扰素 α2a 和干扰素 α2b 是现在临床上使用最为广泛的慢性病毒性肝炎的特效药[1]。两者的氨基酸序列仅在第 23 位的氨基酸不同，干扰素 α2a 是精氨酸(K)，而干扰素 α2b 是赖氨酸(R)。市售重组干扰素 α 是由细菌或毕赤酵母菌表达的非糖基化蛋白质药物 ......