沈阳，张书红，汤亭亭

    不同来源成体干细胞BMP-2基因转染并微囊化后细胞活性及分泌量观察

    沈阳，张书红，汤亭亭

    目的比较不同来源成体干细胞 BMP-2 基因转染并微囊化后的存活情况，并检测分泌至微囊外的 BMP-2 蛋白数量。

    方法从大鼠的骨髓、脂肪和滑膜组织内分离培养不同类型的成体干细胞：骨髓间充质干细胞(BMSCs)、脂肪干细胞(ADSCs)和滑膜干细胞(SMSCs)。利用高压静电装置制备海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊，在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞在微囊内的存活情况。利用含有 BMP-2 基因的重组腺病毒感染不同来源的成体干细胞后微囊化包裹，用酶联免疫吸附法(ELISA)检测分泌到微囊外的 BMP-2 蛋白量。

    结果包裹 4 周后荧光显微镜观察发现，BMSCs、ADSCs和 SMSCs 可在微囊内长期存活。ELISA 检测发现，3 种转基因细胞在微囊化后都可以持续分泌 BMP-2 蛋白，其中BMSCs 分泌最多，在第 2、3、4 周和其他 2 种细胞相比有明显差异(P< 0.01)。

    结论3 种来源的成体干细胞都可以作为 BMP-2 基因给药促进骨再生研究的候选细胞，其中以骨髓来源的间充质干细胞为首选。

    成体干细胞； 骨形态发生蛋白质类； 基因转移技术

    大段骨缺损、骨延迟愈合和不愈合是目前骨科临床治疗的难点。通过移植携带生物活性分子基因的细胞来促进组织愈合的组织工程方法为解决这一难题提供了新的治疗前景。由于自体细胞的应用存在培养时间长、不能应用于急诊患者等缺点，非自体细胞的移植受到了广泛重视。在既往的研究中，我们已确立了一种利用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊包裹基因转染成体干细胞的方法，证实微囊可对非自体细胞起到免疫隔离作用，目的蛋白也可持续释放到微囊外产生生物学效应[1-2]。

    在前述研究中我们应用的是骨髓来源的间充质干细胞(BMSCs)作为基因转染的靶细胞，而在目前的组织工程研究中，脂肪来源的干细胞(ADSCs)和滑膜来源的干细胞(SMSCs)也得到了广泛应用[3-4]。因此本研究试图比较骨髓、脂肪、滑膜三种不同来源的干细胞(BMSCs、ADSCs 和SMSCs)在微囊化包裹后的存活情况，以及 BMP-2基因转染后这些细胞分泌到微囊外的目的蛋白数量，以期为骨再生的微囊化基因给药研究提供一种最适宜的细胞。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 SPF 级 SD 大鼠 ......