陈书安，王晓东，袁晓凡，赵兵，王玉春

    藏红花(Crocus sativus L.)被誉为“植物黄金”，是一种名贵的妇科良药，有望成为 21 世纪最理想的抗癌药物之一[1-3]。但藏红花种植条件苛刻、适宜栽培的地区有限、田间栽培过程易感染病毒，加之其柱头入药、产量极低，致使其资源短缺、价格昂贵[3-4]。通过植物细胞培养体系生产藏红花素，是解决藏红花资源短缺的有效途径之一[3]，其中生物反应器技术是其实现产业化的关键技术之一。

    为建立藏红花细胞培养体系，从诱导的 229 株藏红花愈伤组织中筛选出一株藏红花素含量高、生长速度快的细胞系[4-5]；经脱毒处理，该细胞系无国内外报道的侵染藏红花的病毒[6]，经优化建立了其摇瓶培养体系[7-8]。为实现藏红花素的规模化生产，选择鼓泡塔式反应器作为研究的对象，探求其生物反应器培养的参数。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系 藏红花球茎 1 细胞系，黄色，质地疏松，不透明。

    1.1.2 培养基 以 B5(Gamborg，1968)[9]为基本培养基，添加 1 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)、2 mg/L 萘乙酸(NAA)和 300 mg/L 水解酪蛋白，简称 M2B5 培养基。

    1.1.3 仪器 UV-2802 紫外可见光检测器为尤尼柯(上海)仪器有限公司产品；2.5 L 鼓泡式生物反应器：反应器罐体高 30 cm，直径为 12 cm。

    1.2 方法

    1.2.1 生物量的测定方法 将藏红花细胞悬浮培养液，经8000 × g 离心 20 min，取离心沉淀的细胞置于烘箱，60 ℃烘干至恒重，称其干重即为生物量。

    1.2.2 藏红花素含量测定方法 将藏红花细胞悬浮培养液，经 8000 × g 离心 20 min，回收上清液；将离心沉淀的细胞用 20 ml 50% 的甲醇在室温下摇床振荡提取 2 h 后，经 8000 × g 离心 20 min，回收上清液；将二次离心沉淀的细胞再用 10 ml 50% 的甲醇在室温下摇床振荡提取 1 h，8000 × g 离心 20 min，回收上清液。合并上述三次离心回收的上清液，经真空浓缩直至 1 ml 以下，膜(0.22 μm)过滤后用 HPLC 测定。藏红花素的检测色谱柱：Nucleosil C18(3.9 mm × 150 mm，5 μm 粒度)；紫外可见光检测器(波长范围：190 ～ 800 nm)；检测波长：440 nm；流动相：53% 甲醛溶液；流速：0.7 ml/min ......