杜郁，王丽，王丽非，司书毅，杨媛，洪斌

    ·论著·

    以Apo A-I为靶点的基因表达上调剂筛选模型的建立

    杜郁，王丽，王丽非，司书毅，杨媛，洪斌

    目的建立靶向人 Apo A-I 转录调控序列的高通量药物筛选模型，用于筛选 Apo A-I 基因表达上调剂。

    载脂蛋白 A-I； 转录启动子； 荧光素酶类； 药物评价，临床前

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2011, 6(3):178-183

    高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)水平降低是心血管疾病的独立风险因素，它和动脉粥样硬化疾病的发生存在明确的负相关关系[1]。研究发现，HDL-C 的水平每增加 1 mg/dl，心血管病发生的风险可降低 2% ～3%[2]。随着研究的深入，目前倾向认为高密度脂蛋白(HDL)的心血管保护作用很大程度上依赖于它所介导的胆固醇逆转运(reverse cholesterol transport，RCT)过程，即 HDL 将胆固醇从周围组织(包括粥样斑块)转运到肝脏以胆酸形式代谢[3]。因此，提高和改善 HDL 水平与功能，有可能成为动脉粥样硬化治疗的新途径。

    载脂蛋白 A-I(apolipoprotein A-I，Apo A-I)是 HDL 的主要结构蛋白和功能单位，与 HDL 的形成密切相关。Apo A-I 在血浆中的浓度与 HDL-C的水平相关，可通过多种机制发挥抗动脉粥样硬化作用[4]，有望成为动脉粥样硬化的治疗靶基因之一。通过对肝细胞中 Apo A-I 基因调控区缺失图谱和转基因鼠的研究发现，转录起点 –220 ～ –110 bp 的启动子区域存在几个重要的转录因子结合位点，包括 Site A(–214 ～ –192 bp)、Site B(–169 ～ –146 bp)和 Site C(–134 ～ –119 bp)，对于维持肝细胞中 Apo A-I 的正常转录和表达是必需的[5]。本研究以上述Apo A-I 的启动子序列为靶点，利用报告基因体系，建立稳定转染细胞用于基因表达上调剂的高通量筛选。将 Apo A-I 基因上游的 –277 ～ +173 bp 片段克隆于荧光素酶报告基因的上游，得到受 Apo A-I 基因启动子调控的重组报告基因表达质粒，并获得了稳定转染 HepG2 细胞的单克隆细胞株，经筛选条件优化和评价，建立了针对人 Apo A-I 的基因表达上调剂药物筛选模型。

    1 材料与方法 ......