赵叶琳，赵晓寅，孙凌云，侯亚义

    人脐带间充质干细胞(MSC)具有免疫抑制作用和多向分化潜能，被用于治疗各种疾病。而雌激素与许多自身免疫性疾病的发生与发展有关，以前的研究中发现 17β-雌二醇(E2)能影响破骨细胞内细胞骨架的结构，下调微丝肌动蛋白(F-actin)的表达，降低破骨细胞的活动能力，从而抑制破骨细胞的骨吸收功能[1-2]。E2对 MSC 有多种调节作用，如能抑制 MSC 的成骨分化[3]及抑制 MSC 的免疫调节功能[4]。但关于 E2 对 MSC 细胞骨架和超微结构的影响还未见报道。

    F-actin 呈纤维状，是构成细胞内微丝骨架的主要部分。肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)复合物又是构成 F-actin 的结构基础[2]。F-actin 在细胞内的聚合及解聚，与细胞的运动、形态及细胞内外的信息传递等功能有关，为细胞内外信息传递提供分子桥梁，控制细胞形态、运动和增殖等生物效应[5-6]。

    纽蛋白(vinculin)是一种与黏着类型连接形成有关的细胞骨架蛋白，存在于细胞—细胞及细胞—基质间的黏着部位，其作用是将 F-actin 锚着于连接点形成部位的细胞膜上[7]。纽蛋白的表达对 MSC的黏附功能有着重要作用[8]。

    本研究中，我们通过激光共聚焦显微镜(laser confocal microscope，LCM)观察了 E2 作用下细胞骨架和细胞连接的情况，用透射电子显微镜(transmission electron microscopy，TEM)观察细胞内部细胞器的变化，探讨 E2 作用后 MSC 功能变化的可能原因。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 标本来源 自然足月剖腹产的健康胎儿脐带，获自南京大学医学院附属鼓楼医院。所用材料均严格遵守医学伦理道德，经产妇及家属认可，并经医院医学伦理委员会批准。

    1.1.2 主要试剂 DMEM/F12 培养基和优级胎牛血清(FBS)购自美国 Gibco 公司；胶原酶 II、中性蛋白酶、透明质酸酶购自美国 Sigma 公司；荧光标记小鼠抗人抗体 PE-CD117、PE-CD44、PE-CD29、FITC-CD31、FITC-CD45 和 APC-CD105单克隆抗体购自美国 Ebioscience公司；鼠 IgG-PE、鼠抗人纽蛋白单克隆抗体购自美国 Santan 公司；17β-雌二醇、鬼笔环肽(Phalloidin- FITC)购自美国 Sigma 公司；明胶、牛血清白蛋白(BSA)购自中国 sunshine 公司；聚乙二醇辛基苯基醚(Triton 100)购自中国 beyotime 公司 ......