刘馨，廖云

    肠道病毒 EV71 主要感染消化道和呼吸道，然后通过血管运送至其他器官产生病毒血症。在病毒与血管平滑肌细胞的相互作用过程中，可以导致血管壁细胞的坏死和血管炎。这种炎症的产生，与病毒上调或抑制某些基因的表达，从而诱导产生的急性免疫反应有关。EV71 上调血管细胞间黏附分子VCAM-1 表达，在小鼠血管平滑肌细胞中，EV71感染可通过诱导血小板衍生生长因子受体(platelet derived growth factor receptor，PDGFR)磷酸化，而刺激 VCAM-1 的表达[1]。另外的研究发现，EV71感染人微血管壁细胞后，能够诱导 Toll 样受体 4(Toll like receptor，TLR4)的表达[2]。

    人二倍体细胞 KMB17 是理想的疫苗生产用细胞基质，肠道病毒 EV71 能适应于 KMB17 细胞，并产生裂解性感染。KMB17 细胞表面 EV71相关的受体构成情况如何？这些受体的构成是否与 EV71 病毒能有效适应于 KMB17 细胞有关？为了回答上述两个问题，本文选用了与 EV71 感染相关的 TLR4 和 PDGFR-αR1 两种细胞表面受体作为研究对象，利用流式细胞分析(FACS)、实时定量 PCR(real-time PCR)等技术对这两种受体在KMB17 细胞表面的表达情况以及受体特异的mRNA 片段进行了检测，分析了不同细胞代次、不同细胞周期时段及病毒感染前后这两种受体的表达情况。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂材料 KMB17 细胞、EV71 病毒株为中国医学科学院医学生物学研究所保存；单克隆抗体 PDGFR-αR1(FITC 标记，sc-32287)、TLR4(PE标记，sc-13593)购自美国 Santa Cruz公司。SYBR Premix Ex Taq? II、Prime-script RT-PCR 试剂盒、碘化丙啶(PI)、Trizol 购自大连宝生物工程有限公司；DMEM 培养基购自美国 Hyclone 生物技术公司。

    1.1.2 仪器 Prism 7500 实时定量 PCR 仪购自于美国 ABI 公司；FACSCanto II 流式细胞仪为美国 BD 公司的产品。

    1.2 方法

    1.2.1 PCR 引物 使用 NCBI Primer-BLAST 设计了 PDGFR-αR1、TLR4 特异基因片段的引物，由上海生工科技有限公司合成，序列分别如下： ......