潘小霞，张顺，袁静，文喻玲，陈元鼎

    轮状病毒(rotavirus，RV)属于呼肠病毒科(Reoviridae)轮状病毒属，是引起婴幼儿急性胃肠炎的主要病原体，每年死于 RV 感染者多达 61 万余人[1]。RV 由三层蛋白组成：核心衣壳由各含12 个分子的 VP1 蛋白(转录酶)和 VP3 蛋白(鸟苷酸转移酶)及 120 个分子的 VP2 蛋白组成[2]；中间层衣壳由 780 个分子的 VP6 蛋白组成，VP6是病毒的组(亚组)抗原蛋白；外层衣壳由两个具有中和抗原性的 VP4 和 VP7 蛋白组成，各含有180 个和 780 个分子。根据 VP6 蛋白抗原性差异，可将 RV 分为 A ～ G 等 7 个组，其中 A 组RV 是婴幼儿急性胃肠炎的主要病原体。根据编码框(open reading frame，ORF)核苷酸序列同源性差异，至少可以将 A 组 RV 的 VP6 分为 14 个不同的基因型[3]。虽然 VP6 蛋白不是病毒转录酶，但 VP6 蛋白的存在对病毒的转录必不可少。此外，VP6 蛋白在维持病毒形态、病毒进入细胞和组装过程中起物理受体的作用。病毒进入宿主细胞后，外壳蛋白的缺失和形成表层为 VP6 蛋白的两层病毒颗粒(double-layered particle，DLP)是转录产生mRNA 所必需的[4-5]。大量实验证明，VP4 和 VP7蛋白并非是免疫保护反应的唯一抗原，RV 中壳蛋白 VP6 也能刺激机体产生免疫保护反应。但这些试验都是在小鼠模型中完成的，如果能证实 VP6在人体内也具有安全有效的保护作用，那么研究并发展以 VP6 为基础的疫苗会具有很好的应用前景[6]。

    绿色荧光蛋白(green fluorescence protein，GFP)是较好的活体分子标志物，易与目的基因形成融合蛋白且不影响自身目的基因产物的空间构象和功能。对多数宿主的生理无影响，不需依赖任何辅助因子或其他基质就能在紫外线下激发出性质稳定易检测的荧光。通过改造获得的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein，EGFP)是 GFP 的一个突变体，荧光强度更高，光漂白抗性更强。

    本实验通过构建 RV VP6 蛋白基因与 EGFP蛋白基因融合表达载体并转染到恒河猴肾传代细胞 MA104 细胞中，EGFP 与目的基因 VP6 融合标记为绿色，在荧光显微镜下观察 VP6 基因的蛋白表达水平及其在细胞内的分布情况和表达量的变化，为探讨 VP6 基因在结构功能及免疫保护作用方面奠定理论基础。 ......