莫桂玲，胡朝晖，喻长顺，詹益鑫，朱庆义

    假肥大型肌营养不良症(Duchenne/becker muscular dystrophy，DMD/BMD)是一种严重的神经肌肉疾病，它是由于DMD 基因突变导致的X连锁隐性致死性遗传病，目前尚无有效的治疗方法[1]。为提高检测 DMD 基因单个外显子缺失突变的准确率，避免将单个外显子的微小突变误判为缺失突变，为DMD 家系成员的遗传咨询和产前基因诊断提供准确的依据，本实验室通过多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA)、PCR 技术和基因测序方法的联合应用，对疑为DMD 基因单个外显子缺失的样本进行基因诊断。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 研究对象 研究对象为来自全国各医院神经科或儿科的患者，所有研究对象均签署知情同意书。

    1.1.2 主要材料 阴性和阳性对照品采用美国病理学家协会(College of American Pathologists，CAP)的DNA 质控品。MLPA 检测试剂盒 SALSA MLPA kit P034-A2/P035-A2 DMD/Becker 购自荷兰MRC-Holland公司[2-3]；DNA 提取试剂盒 QIAamp DNA blood mini kit 购自德国 Qiagen公司；GeneAmp 9700 PCR 仪和genetic analyzer 3130xl毛细管电泳仪购自美国 ABI公司；Genescan-LIZ 500 ladder 为美国 ABI公司产品；DNA Marker(MD101-Marker I)购自天根生化科技(北京)有限公司；ActiTaq DNA Polymerase 为德国罗氏公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 样品采集及预处理 受试者安静状态下采集 EDTA 抗凝外周血 2～3ml。采用 QIAamp DNA blood mini kit DNA 提取试剂盒提取基因组DNA，用紫外分光光度计测量提取 DNA 在260 nm和280 nm 下的吸光度 A260和A280计算A260/A280及DNA 浓度，确保 DNA 浓度在10～50 ng 之间，冷冻保存。受试样品共 185 例，为2009–2010年送本实验室进行 DMD 基因检测的血样 ......