曹琳，张磊，田莉，邓杰

    重组人干扰素 α2b是一种广谱的抗病毒药物，对乙型肝炎、单纯疱疹、带状疱疹、尖锐湿疣、疱疹性口炎、流感病毒等均有抑制作用，但是临床上常规使用的干扰素剂型多为肌肉或静脉注射给药，对病毒造成的局部皮肤或黏膜感染体内半衰期短，难以在病变部位达到有效剂量，而加大给药剂量又会增大干扰素对机体的毒副作用，限制了其临床广泛应用。因此，将干扰素开发成外用经皮给药剂型对皮肤病毒性感染疾病治疗具有现实意义[1-2]。本文针对拟定适应证利用细胞病变抑制法(CPE)设计了体外抗单纯疱疹病毒 I 型及II 型、流感病毒甲型及乙型以及SARS 冠状病毒药物有效性试验模型，研究重组人干扰素 α2b 喷雾剂(rIFN α2b)对相关病毒的体外抗病毒作用，为进一步开展临床研究提供依据，并开展了临床治疗单纯疱疹和尖锐湿疣验证。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 受试药物 重组人干扰素 α2b 喷雾剂，20ml/支，rIFN α2b 含量为10万 IU/ml；对照品为空白基质，包装与受试药物相同，均由天津华立达生物工程有限公司提供，2～10 ℃ 保存。阳性对照药物酞丁安搽剂(喷雾型)0.5%(W/V)×10ml，生产厂家为北京四环制药厂，分装于外形与受试药物相同的瓶内，遮光、密闭在阴凉处保存。人标准干扰素 α 2.4万 IU/ml，购自中国药品生物制品检定所。

    1.1.2 病毒株 单纯疱疹病毒 I 型 Sm44 株(HSV-1)购自中国药品生物制品检定所；单纯疱疹病毒 II 型 333 株(HSV-2)、流感甲型病毒90-15、流感乙型病毒 95-184 均由中国预防医学科学院病毒所惠赠；SARS 冠状病毒北京一号(BJ-01)由北京华大基因研究中心试验室保存。

    1.1.3 细胞株 非洲绿猴肾传代细胞(Vero)来源于美国模式菌种保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)，中国医学科学院医学生物学研究所保存；人胚肾原代细胞(HEK)按常规制备，细胞长成单层后用于实验。

    1.1.4 培养基 Eagle’s MEM 为美国 Gibco公司产品；DMEM 为美国 Invitrogen公司产品；胎牛血清为美国 Gibco公司产品。

    1.1.5 试剂 青霉素、链霉素和卡那霉素为华北制药厂产品；4-羟乙基哌嗪乙磺酸(Hepes)、非放射性细胞增殖检测试剂盒(MTS)、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)为美国 Promega公司产品；四甲基偶氮唑盐(MTT)为美国 Sigma公司产品；L-谷氨酰胺、碳酸氢钠、十二烷基磺酸钠(SDS)为北京化学试剂公司进口分装 ......