周旋，倪茂巍，陈茂，朱忠欣，丛维涛，金利泰

    凝胶电泳是分离蛋.白质及多肽的一种强有力的生化分析工具。而蛋白质染色在凝胶电泳系统中则是一个重要的组成部分，随着蛋白质组学的飞速发展，凝胶蛋白质染色技术已成为衔接二维电泳和下游质谱分析的关键环节。目前，常用的凝胶上蛋白质染色方法主要有染料染色法、银染法、负染法和荧光染色法。本文对近几十年来在凝胶上蛋白质染色技术方面所取得的进展和突破进行总结，并对未来的发展方向做出展望。

    1 染料染色法

    1.1 考马斯亮蓝染色法

    由于考马斯亮蓝(CBBR 和 CBBG)具有成本低、操作便捷及质谱兼容性好等特点，使得该类染料成为最常用的蛋白质染色染料。考马斯染料最初是应用于纺织工业中羊毛的染色，Fazekas 等[1]在 1963 年首次将考马斯亮蓝 R-250应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转移到醋酸纤维素膜上蛋白质的染色，取得了较好的效果。随即，考马斯亮蓝 R-250和它的二甲基化衍生物考马斯亮蓝 G-250 又被应用于聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质染色[2]。在接下来的 20 多年中，不断有研究者针对蛋白质的考马斯亮蓝染色方法进行优化，各项技术指标如灵敏度、染色时间和凝胶背景都有一定程度的改善，但总体染色灵敏度还是较低，约为几百纳克到几微克，染色时间较长，且凝胶背景偏深[3-4]。

    Neuhoff 等[5]开发的胶体考马斯亮蓝染色法，使考马斯亮蓝在染色液中形成胶束，从而有效提高了染色灵敏度，降低了凝胶背景，是考马斯亮蓝染色法优化史上具有重大意义的改进，通过该方法得到的染色灵敏度可以和银染相媲美。Candiano 等[6]发明的“Blue Silver”考马斯亮蓝染色法是该类染色法中的又一大进步，其灵敏度可达 2 ng/band。Pink等[7]在前人研究的基础上，最近开发出了一种高灵敏和质谱兼容性好的新型考马斯亮蓝染色法，通过改变染色液中磷酸的浓度，使得灵敏度达到 2 ng/band，同时质谱兼容性也得到了很大提高。虽然考马斯亮蓝蛋白质染色的原理尚未完全确定，但其可能机理主要为：考马斯亮蓝是二磺酸化的三苯甲烷类染料，其可通过染料的磺酸基和蛋白质上质子化的碱性氨基酸间以静电力相结合。其次，还可通过染料的疏水性残基和蛋白质的疏水性区域的作用产生疏水性力，同时也存在氢键和范德华力的作用[5]。

    1.2 离子对染料染色法

    在蛋白质染料染色的研究过程中，特别要指出的是离子对染色技术的提出，此项技术是蛋白质染料染色法理论上的一大创新 ......