梁权，罗春贞，毛培菊，王缦

    ·生物诊断技术·

    HIV-1 gp41蛋白的表达及其免疫反应性

    梁权，罗春贞，毛培菊，王缦

    目的高效表达 HIV-1 gp41 基因片段，满足生产 HIV 体外检测试剂的需要。

    HIV-1； 蛋白质类； 免疫活性

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2011, 6(6):415-419

    HIV 在我国的流行形势日趋严峻，全国首次HIV 分子流行病学调查发现有 A、B(欧美 B)、B′(泰国 B)、C、D、E 和 F 7 种亚型，其中 B(占 47%)、C(占 34%)是主要流行亚型。第 2 次全国 HIV 流行病学调查显示有 A、B、B′、C、D、E、F 和 G 8 种亚型及 2 个流行重组型 BC 和AE，其中 B′ 亚型(29%)、重组型 BC(50%)和重组型AE(15%)是主要流行亚型[1]。

    由于 HIV 病毒的高度变异性，针对各亚型gp41 蛋白表位的特异性抗体有一定差异，使用HIV 抗体检测试剂盒检测患者血清中的 HIV-1 gp41 抗体会出现假阴性结果。如研究显示，目前所用的几种抗体检测试剂盒检测 A 亚型 HIV 病毒感染者血清敏感性较低。因此，加强对 HIV-1 各亚型 gp41 蛋白表位的比较研究对提高现有检测试剂盒的免疫反应性具有重要意义。

    在前期工作中，我们表达了几种我国 HIV-1主要流行亚型的 gp41 蛋白，对这些蛋白进行免疫反应性和特异性的测定，根据测定结果对 gp41 基因表位进行筛选和整合[2-5]，优化出一条含多亚型表位的 gp41 基因片段。本实验在前期工作的基础上，将 gp41 基因片段的 N 端引入一段融合基因，通过大肠杆菌原核表达方式获得溶解性较好、特异性和免疫反应性均较高的重组蛋白，为 HIV 体外血清学诊断提供原料，也为进一步研究 HIV-1 gp41蛋白表位的功能打下基础。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1质粒和菌种 含部分心肌钙蛋白(cTnI)基因的表达质粒 E1 由本公司构建并保存；宿主细胞DH5α、BL21DE3 由本公司保存；含优化的 HIV-1 gp41 基因质粒 X1 由本公司前期构建并保存。

    1.1.2主要试剂 国家药品生物制品检定所 HIV参考血清(批号：20081201)由本公司保存；HIV 抗体测定反应板 HIV plate 由本公司生产并保存；1000 份 HIV 确证阴性血清由本公司保存；含部分cTnI 基因(与 E1 质粒中 cTnI 基因相同)与HIV-2 gp36 基因的重组蛋白 CP1 由公司制备并保存；HIV-1 gp41 蛋白 X1 由公司制备并保存；辣根过氧化物酶(HRP)标记鼠抗人二抗 IgG-HRP由本公司制备并保存；HIV-1 阳性血清、HIV-2 gp36单抗(monoclonal antibody ......