许四宏，王佑春

    ·生物诊断技术·

    重大传染病诊断技术

    许四宏，王佑春

    近年来，我国在突发传染病，尤其是严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)和甲型H1N1 流感等的防控经验显示，诊断试剂在传染病的预防和控制中发挥着越来越重要的作用。这些诊断试剂从方法学上讲，主要分为两大类，即免疫学诊断和分子诊断。本文对这两类诊断技术进行简要综述。

    1 免疫学诊断技术

    免疫学诊断技术一般是以抗原抗体特异性反应为基础的检测技术，主要包括酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫层析技术以及最近发展的以化学发光法、时间分辨荧光分析法等为代表的新型检测技术。

    1.1 酶联免疫吸附实验(ELISA)

    1971 年，Engvall 和 Van Weemen 分别建立的酶联免疫吸附实验是经典的免疫学诊断技术，其基础是抗原或抗体的固相化(包被)及抗原或抗体的酶标记[1-2]。包被后的抗原或抗体保留免疫学活性，可与待测样品中的抗体或抗原形成免疫复合物；酶标记后的抗原或抗体可继续与抗原抗体复合物进一步形成复合物，复合物中的酶可催化酶的底物发生显色反应，其色度的深浅与待测样品中受检物质的量成正比。

    根据反应中形成免疫复合物的种类，ELISA 可以分为4 类方法，即夹心法、间接法、捕获法和竞争抑制法。夹心法包括双抗原夹心法和双抗体夹心法，包被物为抗原(或抗体)，以酶[一般为辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)]标记的抗原(或抗体)为酶结合物。间接法的包被物为抗原，以酶(一般为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)标记的二抗为酶结合物。捕获法一般用于 IgM 抗体的检测，包被物为抗人 IgM 抗体，用于捕获待测样品中特异性或非特异性的 IgM 抗体，酶结合物为酶标记的针对特异性抗原的抗体。竞争抑制法是先将特异性抗原(或抗体)包被于微孔板，随后分为两组，一组仅加酶标记的抗原(或抗体)，另外一组则同时加入酶标记的抗原(或抗体)和被测抗原(或抗体)的混合物，最后加入底物显色，通过两组底物显色的差异判定是否为阳性。

    目前，ELISA 技术已广泛应用于重大传染病的诊断，如双抗原夹心法用于检测 HIV 抗体、双抗体夹心法检测HBsAg、间接法用于检测 HCV 抗体等。随着技术的不断发展，近年来，抗原抗体联合检测试剂也逐步在中国上市，比如国外 20 世纪末 21 世纪初研发成功的 HIV 抗原抗体联合检测试剂，就是利用双抗原夹心法检测 HIV 抗体的同时利用双抗体夹心法检测 HIV-1 p24 抗原 ......