叶元康

    ·生物诊断技术·

    革兰染色的现况和进展

    叶元康

    本文对经典的革兰染色、革兰染色的自动染色仪、自动染色鉴别直读仪和革兰染色智能化与环保节水作一综述和展望。

    革兰染色(Gram stain)是 1884 年由丹麦医师 Christain Gram 创立，染色将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两大类，在细菌学的形态鉴定、分类和用药选择等方面发挥了重要的作用[1]。世界各国常用的革兰染色为哈克改良法(Gram stain-Hucher modification)，即经典的四步法革兰染色[2]，该染色使用 4 种试剂：结晶紫的混合液(crystal violet)，碘液(iodine)，酒精脱色液(alcohol decolorizer)和沙黄复染液(safranin O)。正规的染色时间约需 3 分钟 45 秒，试剂用量约 16 ml。但是哈克改良法的 crystal violet 在半年内就会出现沉淀，iodine 易自然升化，alcohol decolorizer 易挥发都是导致不良染色结果的重要原因。四步法革兰染色常受染液质量、实验者操作和细菌本身变化等因素影响，会将革兰阳性菌染成红色或革兰阴性菌染成紫色，误导或干扰实际工作，或产生不良后果。四步法革兰染色步骤多，操作麻烦，易出错，质量控制不易进行，难以做到标准化[3]。

    近年来，革兰染色技术已有了不少改进：①快速染色，时间在 45 s 左右；②三步法革兰染色，1994 年美国 Difco公司的产品，将脱色与复染合二为一，可缩短染色时间、减少试剂用量、将脱色标准化和增加准确性；③ 1992 年美国CSM 公司的 Gram stain enhancer 能增强结晶紫的染色；④以stabilized iodine取代传统的碘液：稳定碘液为polyvinylpyrrolidone(PVP)iodine 可维持有效期达 15 个月之久；⑤ 以 Gram basic fuchsin 取代 Gram safranin 染厌氧菌、弯曲菌和李氏特菌更鲜红；⑥二步法革兰染色 ......