刘娟，姜涛，秦鄂德，秦成峰

    ·生物诊断技术·

    环介导等温扩增技术在流感病毒检测中的应用

    刘娟，姜涛，秦鄂德，秦成峰

    流感病毒是引起人类流感的病原体之一，属于正黏病毒科，分为甲型、乙型和丙型流感病毒，其中甲型和乙型流感病毒对人类具有流行病学意义。流感病毒感染可导致一系列呼吸道疾病，临床症状从轻微的上呼吸道症状至急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭，甚至死亡[1]。流感大流行传播迅速，波及范围广，发病率和死亡率高，严重威胁着人类健康。1918 年的 H1N1“西班牙流感”、1957 年 H2N2“亚洲流感”和 1968 年 H3N2“香港流感”三次流感大流行导致全球超过 5000 万人死亡。最近暴发的 2009 年新甲型H1N1 流感大流行，全球估计有数亿人感染，约 2 万确诊死亡病例[2]。因此流感病毒的早期快速检测技术对于流感的防控及治疗具有重要的意义。

    2000 年，Notomi 等[3]建立了一种新型的快速核酸扩增方法——环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)。近些年 LAMP 方法逐渐受到关注，其在病毒性疾病诊断中得到了广泛的应用[4]。本文特针对该技术在流感病毒检测中的应用和前景作一综述。

    1 流感病毒的检测方法

    流感病毒的早期快速检测对流感的防控非常重要，不仅可缩小呼吸道疾病的传播范围及风险，同时也为临床呼吸道疾病病原诊断及用药提供可靠的依据。目前流感病毒的检测技术主要包括病毒分离、血清学检测、病毒抗原检测和核酸检测。临床早期诊断较为常用的快速检测方法主要包括免疫层析法和病毒核酸检测技术[5]。免疫层析法是近年来发展的一种快速诊断技术。该技术利用免疫胶体金或免疫酶染色可使特定区域显示一定的颜色，从而实现特异性的快速免疫诊断。这类方法目前存在的主要问题是灵敏度较低[6]。目前流感病毒早期快速检测最主要的手段仍然是核酸检测方法，主要包括逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光RT-PCR 技术，但常规 PCR 技术需要电泳判读结果，易造成环境污染；实时技术则需要较昂贵的仪器，这些限制了该项技术在流感病毒检测中的广泛应用。

    2 LAMP 技术的原理

    LAMP 法是一种新型的核酸扩增技术，与传统的核酸检测方法相比，具有灵敏性及特异性高、简便快速易于判断等多种优点。LAMP 反应是在具有链置换活性的BstDNA聚合酶作用下，利用能识别目的基因上 6 个独立区段的4 条引物(图1) ......