陶永清，刘崇基，李健娇，徐新，王津晗，韩娜，张磊，赵辉，阮海华，王昌禄

    沙门菌是严重威胁人类健康的主要食源性致病菌之一。据统计，在世界各国的细菌性食物中毒中，沙门菌引起的食物中毒常列榜首[1]，我国内陆地区也以沙门菌导致的食物中毒为首位[2]。

    SopB 是沙门菌主要致病性蛋白成分，是由沙门菌 SPI-1 III 型分泌系统分泌的一种由 561 个氨基酸构成的蛋白质分子，具有肌醇磷脂酶(phosphoinositide phosphatase)活性[3]。SopB 在沙门菌感染过程中发挥着不同的重要功能[4-8]。细胞蛋白激酶 MAPK，包括 Erk1/2(extracellular signalregulated kinases 1 and 2)、p38(P38 mitogenactivated protein kinases)和 JNK(c-Jun N-terminal kinases)，其对沙门菌感染均具有重要的调节作用，因此，研究 SopB 对细胞蛋白激酶 MAPK 信号的影响非常必要。本文采用基因克隆的方法将沙门菌SopB 基因克隆至质粒载体上，检测 SopB 在细胞中的过量表达对细胞蛋白激酶 MAPK 磷酸化水平的调节作用，为 SopB 的功能研究提供更多的信息。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 供试菌株、宿主菌和质粒载体 鼠伤寒沙门菌 Salmonella Typhimurium LT2、大肠杆菌E. coli Trans 10 宿主菌由本实验室保存；表达用质粒 pCS2-EGFP 由本实验改造，该质粒由 pCS2 改造而来，将绿色荧光蛋白(GFP)的基因克隆至质粒表达框的 N 端，并在 pCS2 质粒的多克隆位点(MCS)上加入 FseI 和 AscI 两个酶切位点。

    1.1.2 酶和试剂 质粒 DNA 提取试剂盒和胶回收试剂盒为英国 Omega 公司产品；Vent DNA polymeras 和限制性内切酶 FseI 和 AscI 购自美国 NEB 公司；细菌基因组提取试剂盒购自北京天根公司；T4 DNA 连接酶购自美国 Promega 公司；PVDF 膜购自德国 Milipore 公司；兔抗、Tubulin单抗购自美国 Cell Signaling 公司；其他试剂为国产分析纯试剂。

    1.2 方法

    1.2.1 引物设计与合成 根据 GenBank 上已登录的鼠伤寒沙门菌 Salmonella Typhimurium LT2基因组的全序列(NC_003197)查找到 SopB 基因序列(NP_460064.1) ......