熊小椒，周爽，杨延辉，关艳，肖春玲

    ·论著·

    以次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型的建立及应用

    熊小椒，周爽，杨延辉，关艳，肖春玲

    目的建立以结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型。

    抗结核药； 次黄嘌呤类； 药物评价，临床前

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2011, 6(6):445-449

    近年来，结核病发病率的不断攀升使其又一次成为威胁人类健康的重大传染病之一。结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)的耐药问题日趋严重，结核病与艾滋病共感染现象不断增加，使结核病疫情的防控面临着更为严峻的问题[1-2]，也使新型抗结核药物的开发迫在眉睫。

    次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶(IMPDH)是 MTB从头合成鸟嘌呤核苷酸(GMP)途径的关键酶。IMPDH 能够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)作为受氢体，将次黄嘌呤核苷酸(IMP)氧化生成黄嘌呤核苷酸(XMP)，而 XMP 正是生命体从头合成 GMP 的前体物质。所以，抑制 IMPDH 的活性可以阻止 GMP 的合成，从而抑制 MTB 的生长和增殖。Sassetti 等[3]的研究也证明，编码 IMPDH 的基因为 MTB 生长所必需。而 MTB 的 IMPDH和人源 IMPDH 在其 IMP 结合位点上的核苷酸抑制因子结合区有很大不同[4]。所以，MTB IMPDH是新型抗结核药物的潜在靶点，使研发选择性抑制MTB 的药物成为可能。

    MTB H37Rv 基因组中包含有 3 个编码IMPDH 的基因[5]：guaB1(Rv1843c)、guaB2 (Rv3411c)和 guaB3(Rv3410c)。转座子突变研究已经表明，MTB 的 guaB2 基因是这 3 个基因中唯一的必需基因[3]。

    本研究通过在体外测定重组表达的 MTB GuaB2 蛋白活性，建立了 MTB GuaB2 抑制剂的高通量筛选(HTS)模型，为发现潜在的具有 MTB GuaB2 抑制作用的新型药物提供了一种快速有效的方法。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与材料

    Hi-trap Fast Flow 亲和层析柱、PD-10 脱盐柱(SephadexTMG-25)AKTA 蛋白纯化仪均为美国GE 公司产品；PCR 仪(DNA Engine peltier Thermal Cycler)为美国 Biorad 公司产品；AH 高压匀浆仪(AH-Basic)为加拿大 Ats engineering Inc. 公司产品；Envision 酶标仪为美国 Perkin Elmer 公司产品 ......