红树林植物内生放线菌I07A-01824发酵液中杀线虫活性成分的分离、纯化与鉴定
致死率,阿维菌素,1材料与方法,2方法,2结果,1结构鉴定,2杀线虫活性检测,3讨论
陶玲,旭格拉·哈布丁,韩宁宁,余生艳,闫蕾蕾,栾迎春,刘少伟,郭琳,蒋忠科,余利岩,孙承航线虫是线形动物门(Aschelminthes)线虫纲(Nematoda)的一类蠕虫动物。目前世界上对线虫的关注主要包括三方面:首先是作为模式生物的秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)。秀丽隐杆线虫是生命科学领域研究十分深入的模式生物,因其具有细胞数目少、全身通透、含有大多数动物神经系统的成分分子、基因组序列测序完成、生命周期短、遗传背景清晰等特点,已成为现代发育生物学、神经生物学、遗传学、基因组学以及抗衰老研究的重要模式材料[1-5]。生命科学中很多基本问题的揭示,都得益于该模式生物的引入。其次是对植物造成严重损失的植物病害线虫。据不完全统计,每年由于线虫危害引起的农作物损失达 10%~15%[6-8]。三是对一系列能引起脊椎动物疾病的线虫的研究,如肠蛔虫、钩虫等。
由于秀丽隐杆线虫在生命科学研究中的广泛应用以及病害线虫日趋严重的抗药性问题[9-14],本研究希望通过建立秀丽隐杆线虫模型,发现新型的微生物来源的杀线虫物质,对生命科学的发展和抗线虫剂的发现起到一定的推动作用。最终,本实验以秀丽隐杆线虫致死率为活性检测方法,从红树林内生放线菌 I07A-01824 的发酵产物中分离纯化得到了具有良好杀线虫作用的物质 5,8-二烯十四酸,该微生物产物体外杀线虫活性未见报道。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种 红树林内生放线菌 I07A-01824,分离自我国广西山口红树植物木榄[Bruguiera gymnorrhiza (Linn.) Savigny]叶片,经鉴定后确定其为黄白链霉菌(S.albidoflavus)[15],在供试培养基上形成浅灰白色菌落,无可溶性色素生成[16]。目前保存于中国医学科学院医药生物技术研究所国家药用微生物菌种保藏中心。
1.1.2 供试线虫 秀丽隐杆线虫及其培养方法由福建师范大学田宝玉老师提供。
1.1.3 层析材料及试剂 100~200 目柱层析正相硅胶为青岛海洋化工厂产品;RP-8柱层析反相硅胶、60GF254 分析型薄层色谱铝箔硅胶板和制备型薄层色谱玻璃硅胶板为美国 Merck 公司产品;环己烷、乙酸乙酯、甲醇等均为分析纯,为北京化工厂生产;色谱甲醇为美国 Honeywell Burdick &Jackson 公司产品。
1.1.4 培养基
1.1.4.1 红树林内生放线菌培养基 斜面培养基(YM 培养基):酵母膏 0.4% ......
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