张怡堃，王华，杨萍，李泽良，杨月峰，陈协群，王立生

    自miRNA 被发现以来，已日益成为分子生物学研究的热点。尽管已经取得了大量令人欣喜的成果，但在miRNA的生物发生、功能行为等众多环节上仍有很多未解之谜[1-2]；这一方面要求我们谨慎地看待和应用已有的研究成果，另一方面要加快完善 miRNA 相关的基础分子生物学机制的研究，寻找和开发更多适用于miRNA 研究的新技术，为全面理解 miRNA的生物学意义奠定更为牢固的基础。

    miR29c是我们通过 miRNA 微阵列生物芯片筛选获得的在骨髓瘤细胞中高表达的miRNA，但是对于其在骨髓瘤中的功能研究鲜有报道。为更好研究其功能，我们构建了携带 miR29c的重组腺病毒，并利用流式细胞术检测了其对骨髓瘤细胞凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 质粒、菌株、细胞和重组腺病毒 质粒：穿梭质粒 pShuttle-cmv、腺病毒骨架质粒 pAdEasy-1购自美国 Strategene公司；pcDNA3.0-miR29c 质粒由军事医学科学院郑晓飞教授惠赠。

    菌种：大肠杆菌 BJ5183 购自美国 Strategene公司、DH5a 感受态细胞购自北京博大泰克生物基因技术责任有限公司。

    细胞：人骨髓瘤细胞系 SKO-007和U266(含10% 元亨血清的1640 培养基)、人骨髓瘤细胞系XG7 含 10% 元亨血清，3 ng/ml IL-6的1640 培养基)；HEK293 细胞(Ad5 E1 区转化的人胚肾细胞)为本室保存。

    重组腺病毒：重组腺病毒 Ad5F11p-EGFP、Ad5F11p 为本室构建制备。

    1.1.2 主要试剂 动物基因组抽提试剂盒MagExtractor-Genome、高保真 DNA 聚合酶 KOD-plus 购自日本 Toyobo公司；离心柱型质粒小提试剂盒和琼脂糖凝胶回收试剂盒，脂质体 2000、D2000 marker 购自北京天根生物技术有限公司；限制性内切酶 PacI、PmeI 购自美国 Biolab公司；KpnI、EcoRV、HindIII、XbaI、小牛肠来源的碱性磷酸酶(CIAP)、λ/HindIII Marker 购自日本TaKaRa公司；RPMI 1640、DMEM 培养基购自美国 Sigma公司；FBS 购自美国 Hyclone公司和北京元亨圣马生物技术研究所；其他试剂：胰酶、PBS 按分子克隆配制；琼脂糖购自西班牙 Biowest Agarose Regular公司 ......