刘志容，吴诚义

    上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是上皮细胞在与细胞外因子相互作用过程中因丧失极性及细胞间紧密连接而获得移行和游走能力，转化为具有间质特性细胞的过程。它不仅是多细胞生物胚胎发育的基础过程，更与恶性肿瘤的发生发展和侵袭转移密切相关[1-3]。同样借助 EMT 方式，乳腺癌恶性肿瘤细胞的迁移和运动能力亦可明显增强，从而促进肿瘤的发展与侵袭转移。为此，本研究通过检测细胞表面 EMT 相关标记物 E-cadherin、Vimentin 及其调控因子Snail 在正常乳腺组织、乳腺癌癌旁组织及乳腺癌组织的表达情况，以探讨 Snail 蛋白及其调控的EMT 与乳腺癌发生发展及远处转移的相关性，以及 Snail 蛋白作为乳腺癌治疗关键靶点的潜在意义。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 标本来源 正常乳腺组织取自本院内分泌乳腺外科 2010 年 5 – 6 月 20 例女性乳腺良性病变患者微创手术的切缘标本。患者年龄 20～50 岁，平均 35 岁。

    乳腺癌组织及乳腺癌癌旁组织取自本院内分泌乳腺外科 2010 年 1 – 6 月 60 例女性乳腺癌患者改良根治术的切除标本，并经常规病理学检查证实均为非特殊性浸润性导管癌；60 例患者中20 例同时取癌组织边缘 2～5 cm 的癌旁组织。患者年龄 34～84 岁，平均 54 岁。

    1.1.2 主要试剂 兔抗人 Snail、E-cadherin、Vimentin 多克隆抗体及生物素标记的羊抗兔 IgG抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司；链霉素亲和素-过氧化酶复合物法(SP)免疫组织化学试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 标记蛋白表达的检测 手术切除标本离体后均立即取材，经 4% 甲醛固定，常规石蜡包埋，制成 5 μm 厚连续切片 4 张，其中 1 张用于 HE染色复核病理诊断，其余 3 张分别用于 Snail、E-cadherin、Vimentin 免疫组织化学 SP 法染色。Snail 与 E-cadherin 抗体工作液浓度均为 1∶50，Vimentin 抗体工作液浓度为 1∶100，二抗为生物素标记的羊抗兔 IgG 抗体。按试剂盒说明书操作步骤进行染色，石蜡包埋切片经二甲苯脱蜡及梯度乙醇逐步水化后，采用 0.01 mmol/L 的枸橼酸缓冲液高温抗原热修复 15 min ......