庄乾淑，张文健，叶丽亚，刘虹麟，曹妍婷，成兰云，丁浩，娄晋宁，刘鹏，李建中

    血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是一类具有自我更新能力，并定向分化为成熟血管内皮细胞的前体细胞。近年的研究表明，外周血中存在一定数量的EPCs，其数量的减少是心血管疾病高发生率与高死亡率的一个独立预测因素[1-2]。EPCs 在血管损伤后的内皮细胞修复、防止动脉粥样斑块的形成中发挥重要的作用[3]。循环中的EPCs 在一定的条件下可向血管损伤区或缺血局部迁移，修复内皮细胞的损伤[4]并促进新生血管的形成和侧支循环的建立[5]。因此，EPCs 在心肌梗死、动脉粥样硬化和糖尿病血管并发症等疾病的防治作用中受到越来越多的关注。应用 EPCs 细胞修复血管内皮细胞的损伤或促进缺血区新生血管的形成可能成为未来干细胞临床治疗的一种新技术。然而，目前通过密度梯度离心法或免疫磁珠分选等方法从骨髓、外周血和脐血中分离获得的EPCs 非常有限[6-8]，难以满足临床 EPCs 治疗的需要。因此，寻找和建立一种安全、高效的人源化EPCs的分离和培养方法，将为EPCs的临床治疗应用提供可能。

    在人胚胎发育过程中，早期胚胎血管中存在大量尚未分化成熟的EPCs[9]。因此，本研究探索从人胚胎早期(14周内)的主动脉分离 EPCs，建立体外扩增 EPCs和诱导其分化成为血管内皮细胞的技术方法，为EPCs的临床治疗应用提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器

    DMEM/F12 干粉培养基、明胶、I 型胶原酶和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor，LIF)均为美国 Sigma公司产品；干细胞专用血清购自德国 Biochrom公司；人表皮细胞生长因子(human epidermal growth factor，hEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和DiI 标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)均为美国 Invitrogen公司产品；小鼠抗人 CD133 抗体、小鼠抗人 CD34 抗体均购自德国 Miltenyi Biotec公司；山羊抗人 VEGFR2 抗体购自美国R&D Systems公司；基质胶购自美国 BD公司；RNA 提取试剂盒、逆转录试剂盒均为美国Promega公司产品。

    流式细胞仪为美国 BD公司产品；TSE100 倒置像差显微镜和荧光显微镜均购自日本 Nikon公司；AlphaImagerTM2200 凝胶成像系统购自美国Form公司 ......