张丽蓉，赵莉莉，魏玉珍，李秋萍，王莉宁，余利岩

    结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性缓发型传染病。结核病曾在全世界广泛流行，夺去了数亿人的生命[1]。异烟肼、利福平等药物的使用一度使得结核病得到了很好的控制和治疗，但近年来AIDS的蔓延和多重耐药结核分枝杆菌的出现使得肺结核的防控形势异常严峻，传统药物已不能满足临床需要[2-7]。因此，亟需加紧新型抗结核药物的研发。

    肽脱甲酰基酶(peptide deformylase，PDF)是原核生物蛋白质成熟过程中的一个关键酶，它在蛋白质成熟过程中起关键作用，主要功能就是水解原核生物的新生多肽 N 端甲酰甲硫氨酸的甲酰基。若 PDF 发生突变或缺失，病原微生物则不能生长、繁殖[8]。它在真核生物中并非必需，因此被视为理想的新一代广谱抗生素药物筛选分子靶点之一[9-10]。微生物的次级代谢产物是研制新药的重要资源之一，天然产物来源的PDF 抑制剂报道很少[11-13]，这些报道的天然 PDF 抑制剂结构多为非肽类，其抑酶活性和抗菌活性都相对其他类型的化合物要低，天然来源的结核分枝杆菌的PDF 抑制剂还未见报道。本研究通过建立以肽脱甲酰基酶为靶点的高通量筛选模型，期望在微生物次级代谢产物中发现新型酶抑制活性和抗菌活性均较好的抑制剂，为开发有效的新型抗耐药结核分枝杆菌药物奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与材料

    Veriti 96 well Thermal Cycler PCR 扩增仪为美国 ABI公司产品；?KTA pufifierTM10 层析系统为美国 GE Healthcare公司产品；PolarFluostar 多功能荧光检测仪为德国 BMG公司产品；三肽for-Met-Ala-Ser 为瑞士 Bachem公司产品；Actinonin和Fluorescamin 为美国 Sigma公司产品。

    菌株大肠杆菌感受态 DH5α和BL21(DE3)购于上海生工生物工程技术服务公司；克隆载体pGEM-T easy 购于美国 Promega公司；表达载体pET-28a 由本室保存；细胞 293T、A549和Raw264.7 由本所免疫室惠赠；结核分枝杆菌 H37Rv基因组DNA 由北京市结核病胸部肿瘤研究所陆宇老师惠赠。

    1.2 方法 ......