严伟，金芳纯，范启明，汤亭亭

    利用光学成像系统非侵入性监测乳腺癌细胞在骨环境内的生长情况

    严伟，金芳纯，范启明，汤亭亭

    目的应用稳定表达红色荧光蛋白的人乳腺癌 MDA-MB-231SArfp 细胞系，建立乳腺癌骨移植瘤动物模型，并应用活体成像技术检测肿瘤的生长情况。

    方法注射 MDA-MB-231SArfp 细胞于 BALB/c 雌性裸小鼠胫骨髓腔，应用活体光学成像系统，连续观察肿瘤细胞在体内的生长情况，同时测量肿瘤体积的变化；4 周和 7 周时拍摄 X 线片并做组织学检查，评估肿瘤对骨组织的影响。

    结果利用活体光学成像系统监测发现，至第 3 ～ 4 周期间，肿瘤进入对数生长期；肿瘤大小与荧光信号强度呈线性正相关。X 线片和组织切片显示 MDA-MB-231SArfp 细胞形成溶骨性的骨破坏。

    结论成功建立了可非侵入性监测的乳腺癌骨移植瘤模型，利用活体光学成像系统结合 X线片及组织学检查能够直观、连续、准确地检测肿瘤细胞在骨环境内的生长情况，为后续抗肿瘤药物的筛选和评价提供了新的手段和工具。

    乳腺肿瘤； 疾病模型，动物； 诊断显像；荧光 X 线摄影术

    与生物发光技术相比，荧光成像技术具有标记靶点的多样性、一次可以应用不同的荧光基因标记不同的细胞的优势，因而在分子生物学研究和观察小分子体内代谢(如肿瘤细胞、免疫相关细胞)等方面已经广泛应用。目前常用的荧光基团以表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)和红色荧光蛋白(red fluorescent protein，RFP)为代表，无需底物即可自发荧光，对细胞几乎无毒性。

    本实验利用稳定表达红色荧光蛋白(RFP)的人乳腺癌 MDA-MB-231SArfp 细胞系，通过裸鼠胫骨髓腔注射，建立乳腺癌骨移植瘤动物模型，利用活体荧光成像技术对此模型内的肿瘤生长进行非侵入性的连续监测，同时进行 X 线片、组织切片的检查，发现乳腺癌细胞在骨环境内的生长规律，为后续在动物体内进行抗乳腺癌骨转移药物研究奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株及培养 RFP 标记的乳腺癌细胞系MDA-MB-231SArfp 获赠于澳大利亚西澳大学Jiake Xu 教授，此细胞系是从乳腺癌骨转移灶中分离的细胞，具有骨转移的特性[15]。常规培养于含10% 胎牛血清和 G-418(0.75 mg/ml，用于筛选稳定表达 RFP 的细胞[16])的 DMEM 培养液(美国HyClone 公司产品)中 ......