魏东，王国治

    鼠疫F1蛋白原核分泌性表达及鉴定

    魏东，王国治

    目的构建重组质粒，在大肠杆菌中表达鼠疫菌 F1 抗原。方法用 PCR 方法扩增出带有信号肽的 F1 基因，将其克隆到表达载体 pET30a(+) 上，转化大肠杆菌 BL21(DE3)；用 IPTG 诱导目的基因表达，层析方法纯化 F1 蛋白，测定其分子量、等电点、N 末端氨基酸序列，用 Western blot法检测其抗原性。

    结果根据双酶切和 DNA 测序结果显示，F1 基因成功连接到表达载体 pET30a(+) 中，F1 蛋白主要为分泌性可溶表达。测定纯化后 F1 蛋白的相对分子量约为 15.6 kD，等电点为 4.15，N 末端氨基酸序列与理论序列一致。经 Western blot 鉴定，能被兔抗鼠疫菌 EV 株血清识别。

    结论成功克隆并构建了 F1 蛋白分泌性原核表达系统，所表达的重组 F1 蛋白具有较好的抗原性，为新型鼠疫疫苗研制提供基础。

    耶尔森菌，鼠疫； 克隆，分子； 基因表达

    鼠疫是由鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)引起的烈性传染病。鼠疫菌被列为重要的生物战剂和生物恐怖剂，一直受到高度重视。人类历史上曾有3 次暴发流行，夺走数亿人的生命。目前国内外鼠疫疫情有逐渐活跃的趋势[1]，2010年秋在我国西藏暴发了人间鼠疫，说明鼠疫流行有可能死灰复燃。

    传统鼠疫疫苗有两种，一种是灭活疫苗，对腺鼠疫有一定的保护效果，但因其用强毒株生产，存在着安全性差、保护期短、接种反应率高、不能有效预防肺鼠疫等问题[2-3]；另一种是减毒活疫苗，采用皮上划痕接种，该方法无法定量接种，阳转率低[4]。因此，迫切需要安全有效的新型鼠疫疫苗。

    现有研究证明，鼠疫耶尔森菌免疫保护性抗原主要是荚膜蛋白抗原分子(fraction F1)和表面抗原(V)分子[5-6]。F1 抗原是一种荚膜蛋白，由 100 kb的 pFra 质粒编码，是鼠疫菌的特异性抗原之一。F1 抗原位于菌体表面，有抗吞噬作用，可诱导机体产生抗体，与抗鼠疫感染有密切关系，是制备新型疫苗不可缺少的成分。本研究构建 pET-30a/F1重组表达质粒菌株，并诱导目的基因表达，通过层析纯化，获得了鼠疫 F1 重组蛋白抗原，为新型鼠疫疫苗的研制奠定了基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 菌种及质粒 大肠杆菌 DH5a 和 BL21(DE3)、质粒 pET-30a(+) 均由本室保存 ......