陈保文，都伟欣，杜蓉，闫李侠，郭磊，杨蕾，王国治

    ·论著·

    反相高效液相色谱法和16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的比较研究

    陈保文，都伟欣，杜蓉，闫李侠，郭磊，杨蕾，王国治

    目的比较反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和 16S rRNA序列分析法对分枝杆菌分型鉴别的异同。

    分枝杆菌属； 分枝菌酸； 色谱法，高压液相； 细菌分型技术； 序列分析，DNA； 16S rRNA

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2012, 7(4):263-269

    我国是全球 22 个结核病高负担国家之一，肺结核患者数位居世界第二。2000 年全国第四次结核病流行病学抽样调查报告显示非结核分枝杆菌(NTM)感染比例明显增加，1984 – 1985 年为 4.2%，1990 年为 4.9%，而 2000 年则增至11.1%[1]。NTM 所引起的结核样病变与结核分枝杆菌引起的结核病临床表现相似，很难鉴别，但药物敏感性和化疗方案根据不同菌种有所不同。因此，分枝杆菌菌种的快速鉴定不仅在流行病学上，而且在临床诊断和治疗上均有十分重要的意义。

    结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌统称为结核分枝杆菌复合群(MTB)，和 NTM 在微生物分类中均属于放线菌目分枝杆菌科分枝杆菌属。涂片镜检均呈抗酸杆菌阳性，培养特性和生化反应虽然被称为“金标准”，但所需时间长且步骤繁琐。分枝杆菌细胞壁脂质中含有丰富的分枝菌酸(mycolic acid，MA)，MA 是一类高分子量的含有 α-支链、β-羟基脂肪酸的化合物，其脂肪酸上碳链的长度、不饱和状态、官能团及含量在各生物种型之间呈现指纹特征的特点。因此，利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对分枝杆菌的分枝菌酸进行色谱图的构建，可将分枝杆菌鉴定到种的水平。rRNA 基因被称为细菌的“活化石”，是目前细菌系统发育分类与鉴定的最常用靶基因，其中 16S rRNA 基因因其大小适中、信息量大且高度保守，又能利用测序技术较易得到其序列，故被细菌学家和分类学家所接受[2]。本研究针对《伯杰细菌鉴定手册》中载入的 54 种分枝杆菌中的 49 种模式株采用 RP-HPLC 和 16S rRNA 基因序列分析法分别进行了 MA 色谱图的构建和 16S rRNA基因测序，以比较两种方法对分枝杆菌分型鉴别结果的异同。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1菌株 鸟分枝杆菌(M. avium，95001)、胞内分枝杆菌(M. intracellulare ......