杨军，陈晓黎，王一理，司履生

    ·论著·

    蛋白表达的亚细胞定位影响基因免疫诱导的体液免疫应答水平的研究

    杨军，陈晓黎，王一理，司履生

    目的研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响，为基因疫苗的设计提供参考。

    抗体生成； 免疫疗法； 核定位信号； 基因免疫

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2012, 7(4):270-275

    基因免疫不仅能诱导细胞免疫应答的发生还能诱导机体产生一定程度的体液免疫反应，为包括病毒性疾病在内的传染病的免疫预防以及肿瘤的免疫治疗提供了一条新的途径[1-3]。然而，在某些病毒性感染的免疫预防中能否诱导机体高水平的体液免疫应答、产生高效价的保护性抗体是成功预防的关键，例如在人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染的预防中，针对 HPVL1 蛋白的体液免疫反应发挥重要作用。此外，基因免疫方法的出现无疑也为蛋白和肽类抗原抗体的制备提供了一种新的技术路线，但是，基因免疫虽能高效诱导功能性 CD8+CTL 应答，而诱导的体液免疫应答水平却通常有限[4]，这成为严重制约基因疫苗在预防免疫中应用的最大障碍之一。因此，研究不同因素对基因免疫应答的影响，提高基因免疫诱导的体液免疫应答水平，无论是对基因疫苗能否成功用于感染性疾病的免疫预防还是通过基因免疫途径制备高效价抗体均具有十分重要的理论和现实意义。

    提高基因疫苗的免疫效果一直是基因疫苗研究的重要内容之一[5-7]。众多学者试图通过采用基因枪、电穿孔等不同的免疫途径和免疫佐剂以及优化表达载体的调控元件，或者在表达产物上游加入分泌性前导序列等方式，以期提高基因免疫所诱发的体液免疫应答水平，获得高效价的特异性抗体。但是，表达产物本身在细胞内的不同定位对基因免疫诱发的体液免疫应答水平的影响却知之甚少。本研究通过构建能表达不同细胞定位的 EGFPHPV16L1 融合蛋白和 EGFP-HPV16L1△NLS 融合蛋白的重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 和 pcDNAEGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体，研究表达产物在细胞内的不同定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1菌株、载体和引物 pcDNA3.1(+) 真核表达载体购自美国 Invitrogen 公司；DH5α 菌株、CHO 细胞株以及 Sf-9 细胞株均为本室保存；pFB-EGFP-HPV16L1、pFB-EGFP-HPV16L1△NLS辅助表达载体和重组 Bac/B-EGFP 杆状病毒由本室杨军博士构建并保存 ......