袁娟，牟宗春，游佳，马维骏

    ·论著·

    利用合适的启动子提高外源基因在Jurkat细胞中的表达

    袁娟，牟宗春，游佳，马维骏

    目的通过选择合适的启动子来实现外源基因在 Jurkat 细胞中的高效表达。

    Jurkat 细胞； 启动区(遗传学)； 基因，报告； 萤光素酶类

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2012, 7(4):281-285

    Jurkat 细胞是一种分离自白血病患者外周血T 淋巴细胞的细胞系[1]，通常用于细胞因子受体表达、T 淋巴细胞信号通路、T 淋巴细胞激活、癌症对药物和放射耐受差异的机制、急性 T 淋巴细胞白血病发病机制以及治疗方法等方面的研究[2-3]。该细胞在植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)或者刀豆蛋白 A(concanavalin A，ConA)刺激下能够产生大量的 IL-2，且其产生的 IL-2 能够促进已被抗原激活的效应 T 淋巴细胞的增殖[2]。因此，Jurkat 细胞是一种研究哺乳动物 T 淋巴细胞以及免疫相关功能的良好工具。哺乳动物细胞中这些功能的研究，常常需要有效的启动子过表达相关基因。启动子是基因表达的“开关”之一，其对基因的表达起着重要的调控作用。在真核生物中，不同的转录因子可以与相应的启动子序列结合，从而精确地调控基因表达的时间和水平[4]。因此，选择具有高表达活性的启动子对驱动基因高效表达是非常关键的。在大多数哺乳动物细胞中，一般选择表达活性较强的病毒启动子[5-7]，如猿猴病毒 40 (simian virus 40，SV40)早期启动子、巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)即刻早期启动子。但是在有些哺乳动物细胞中，例如 Jurkat 细胞系中，SV40 和 CMV 启动子的活性并不高[8-9]。而一些细胞启动子，如人源的延长因子 1α(elongation factor-1，EF1α)启动子、人源的泛素 C(ubiquitin C，UbC)启动子也是能高效表达外源基因的启动子[10-11]。基于以上因素，我们利用荧光素酶双报告基因系统检测 SV40、CMV 启动子与 EF1α、UbC启动子在 Jurkat 细胞中的相对活性，通过高活性启动子来实现外源基因在 Jurkat 细胞中的高效表达，以利于 Jurkat 细胞系在哺乳动物 T 淋巴细胞以及免疫相关功能研究中的应用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1细胞及质粒 人 T 淋巴细胞白血病细胞株 Jurkat(Clone E6-1)来自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库/中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心 ......