王丽，贾晓健，姜华军，杜郁，杨帆，司书毅，洪斌

    心血管疾病是当今世界发病率最高的疾病之一，动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是心血管疾病的主要病理基础，而脂质代谢紊乱是公认的危险因子。长期的临床研究表明，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的降低(< 40 mg/dl)是心血管疾病独立而重要的危险因子。美国心血管疾病药物专家 Rader 提出，降低心血管疾病危害的下一个目标就是寻找能够提高 HDL-C 水平和(或)增强 HDL 功能的药物和治疗方案[1]。研究表明，HDL 最重要的抗动脉粥样硬化机制是促进胆固醇的逆转运(reverse cholesterol transfer，RCT)，即胆固醇从外周组织向肝脏转运并排出的过程[2]。高密度脂蛋白受体 SR-BI(人 SR-BI 又称 CLA-1)作为 HDL 受体，通过上调其表达可促进 HDL-C 直接转运至肝脏并最终被排出，加速胆固醇的逆转运，因此，SR-BI 被认为是一个潜在的预防和(或)逆转动脉粥样硬化的新靶点[3-4]。除转录水平的调控外，mRNA 的稳定性相关的转录后水平调控是基因表达水平的另一个重要调控机制，RNA 结合蛋白通过识别特定的 mRNA 3' 非翻译区(3' untranslated region，3'UTR)的顺式作用元件来影响 mRNA 的半衰期，参与 mRNA 稳定性、基因表达定位以及翻译效率等调控[5]。目前，对于基因 mRNA 稳定性的调控已成为药物发现的潜在靶点[6]。

    本研究以人 HDL 受体 SR-BI/CLA-1 基因3'UTR 介导的 mRNA 稳定性为靶点，将 SR-BI/ CLA-1 基因 3'UTR 大约 1200 bp 的全长片段克隆至荧光素酶报告基因的下游，构建受 SR-BI/ CLA-1 基因 3'UTR 调控的重组荧光素酶报告质粒 pc-luc-3'UTR 以及 pGL3-CLAp-luc-3'UTR，并获得了稳定转染 pGL3-CLAp-luc-3'UTR 的 HepG2 细胞的单克隆细胞株，为进一步研究 SR-BI/CLA-1 表达调控机制以及针对人 SR-BI/CLA-1 基因 mRNA 稳定性的表达上调剂高通量筛选模型的建立奠定了基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 质粒、菌株和细胞株 质粒载体 pGEM-T、真核细胞表达载体 pGL3-Basic 和 pcDNA3.1 均 为美国 Promega 公司产品；大肠杆菌 E. coli DH5α 和人肝癌细胞株 HepG2 为本实验室保存 ......