祁婧，张大为，陈娟，康永，郭顺星

    内生菌(endophyte)是指存在于健康植物组织、器官内并不引起明显病害症状的一类真菌[1]。近年来，研究发现植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的次生代谢产物，是新化合物、新药物的潜在资源，在医药、工业、农业等领域具有重要的应用前景[2]。

    石斛属(Dendrobium)植物为附生性兰科(Orchidacea)植物，多为我国传统名贵中药材。石斛属药用植物内生真菌具有丰富的多样性[3]。近年来，研究者从石斛属药用植物的内生真菌的代谢产物中已筛选出许多具有多种生理活性的物质[4-7]，但鲜有关于石斛属药用植物内生真菌抑制 HIV-1 整合酶(HIV-1 IN)活性的报道。本实验采用 HIV-1 整合酶链转移反应活性高通量 ELISA 检测方法，对 202 株石斛属药用植物内生真菌的发酵液和菌丝体的粗提物共计 404 个样品进行了 HIV-1 整合酶抑制活性的筛选，旨在获得抑制 HIV-1 整合酶活性高的代谢产物，为发现新的治疗艾滋病的药物途径提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    本实验筛选所用的真菌菌株分离自束花石斛(Dendrobium chrysanthum)、流苏石斛(Dendrobium fimbriatum)金钗石斛(Dendrobium nobile)、兜唇石斛(Dendrobium aphyllum)、鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum)的根，采自云南西双版纳等地，均由本实验室分离保藏。

    Dynabeads 链霉亲和素磁珠 M-280 试剂盒和 Dynal MPC-9 板式磁珠收集器购自美国 Dynal Biotech 公司；碱性磷酸酶标记地高辛抗体购自美国 Sigma 公司；96 孔透明微孔板购自丹麦 Nunc 公司。

    实验中所用的底物—寡核苷酸链是由上海生工生物工程技术服务有限公司合成、修饰并标记的，具体序列见表 1。 ......