卢锦标，魏东，王国治

    炭疽PA和芽孢双组分候选疫苗免疫豚鼠的免疫学初步评价

    卢锦标，魏东，王国治

    100050 北京，中国食品药品检定研究院结核病疫苗室

    对豚鼠免疫重组 PA 抗原和甲醛灭活芽孢组成的炭疽候选疫苗，评价其免疫效果。

    将豚鼠随机分成 5 个实验组，分别免疫高、中、低剂量候选疫苗、炭疽活疫苗或生理盐水；免疫后不同时间点采血进行抗体检测、XTT 法淋巴细胞增殖检测以及皮肤迟发型超敏反应检测。

    抗体检测结果显示，双组分炭疽候选疫苗能诱导较强的体液免疫应答；XTT 细胞增殖结果显示，外周血淋巴细胞特异性增殖不明显，但所有候选疫苗组针对 rPA DTH 阳转率 24 h 后均为 100%。

    双组分炭疽候选疫苗能诱导豚鼠产生体液免疫和细胞免疫应答。

    芽孢杆菌，炭疽； 炭疽菌苗； 豚鼠； 免疫评价

    炭疽是由炭疽杆菌引起的人畜共患传染病。受炭疽杆菌感染的食草动物是人类最主要的传染源，虽然人类中的炭疽发病率并不高[1]，但炭疽杆菌作为细菌战或生物恐怖袭击首选，如 2001 年美国炭疽邮件事件，潜在威胁不容忽视。

    我国现用的炭疽疫苗是人用减毒活疫苗，主要成分是活的炭疽芽孢，采用皮上划痕接种方式，存在接种剂量难以保证，副反应较重等问题。国外常用的炭疽疫苗有 AVA(美国)和 AVP(英国)，由减毒株培养后，除菌滤液加氢氧化铝吸附制备而成，保护性抗原(protective antigen，PA)是其中最主要的免疫原，其他抗原成分较复杂，存在难定性定量，批间变异大等问题。我国目前的炭疽病预防预案是以化学药品预防为主，在服用化学药品时给予活疫苗接种，可能造成接种无效，同时化学预防还有产生耐药菌的可能，且可能对用作生物武器的抗多种常见药物的炭疽杆菌无效。因此，研究一种新型且安全有效的炭疽疫苗尤为重要。

    上述两种类型的炭疽疫苗组成虽不同，但达到的免疫保护效果相近，提示除了 PA，炭疽芽孢中的抗原对免疫保护效果也起着重要作用[2-3]。本研究利用重组 PA 抗原(rPA)和甲醛灭活芽孢(formaldehyde inactivatedspores，FIS)，经氢氧化铝凝胶吸附后制备炭疽双组分候选疫苗，在豚鼠模型中，评价该候选疫苗的免疫应答，为炭疽新疫苗的改进提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂和仪器 rPA 抗原和甲醛灭活芽孢由中国食品药品检定研究院结核病疫苗室制备；Al(OH)3佐剂为德国 Brenntag 公司产品；XTT 和吩嗪硫酸甲酯(PMS)为美国 Sigma 公司产品；辣根过氧化物酶标记的山羊抗豚鼠 IgG 为美国 Santa Cruz biotechnology 公司产品；豚鼠淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物技术有限责任公司；MK3 酶标仪为芬兰 Labsystems Dragon 公司产品 ......