陈慧，徐琳瑜，钟晓怡，郜恒骏

    双重免疫组化技术在乳腺癌组织芯片中的应用

    陈慧，徐琳瑜，钟晓怡，郜恒骏

    201203 上海芯超生物科技有限公司

    在生物医学和临床研究实践中，经常需要检测两种不同物质是否在同一样品或同一种细胞中共存，最好使用双重染色法在同一个组织样本上进行杂交。双重染色的方法有两种类型，免疫酶组织化学和免疫荧光化学法。目前，在实体肿瘤中，由于甲醛固定石蜡包埋组织过高的荧光信号，免疫荧光法更适合用于冰冻保存的组织[1]。双重免疫酶组织化学需要选择不同显色底物、不同的抗体、不同修复方法进行搭配，操作繁琐，在科研使用比较广泛，但临床操作要求稳定性高、操作简单，所以在临床不常规使用。随着科技进步、技术发展，出现越来越多稳定性好、操作简单的试剂，可以解决上述问题。雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)、C-erbB-2、E-钙黏蛋白(E-cadhein)、p53 这些抗体大都是经典的抗体，纯度高，定位准确，不会出现因为定位不准确或非特异性表达导致对结果的判读误导。而乳腺癌细胞胞浆丰富，呈嗜酸性，伴有多个核仁且明显，且成片生长较容易区分。本实验通过在乳腺癌上表达定位准确、位置单一的抗体进行免疫组化单染和双染的比较，看是否存在结果上的差异，以探讨在临床上进行双重免疫组化的可行性和操作的难易程度，从而达到在临床上广泛应用的目的。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 临床资料 32 例乳腺癌标本取自生物芯片上海国家工程研究中心、上海芯超生物科技有限公司组织库国家 863 项目协作医院近 2 年新鲜手术切除及存档标本，患者均为女性，年龄 33 ~ 93 岁，中位年龄 55岁；其中 II 级浸润性导管癌 8 例，III 级浸润性导管癌 24 例。全部病例术前均未作化疗或放疗。所有组织标本取出后迅速用 10% 中性甲醛溶液固定，常规脱水、石蜡包埋备用。

    1.1.2 实验试剂与仪器 Polink DS-MR Kit for Double Staining Kit 购自 GBI 公司；抗体 ER、RMA-0501 即用型兔抗PR、RMA-0502 即用型兔抗 C-erbB-2、MAB-0198 即用型鼠抗购自福州迈新公司；抗体 E-cadhein、浓缩型兔抗/抗体p53 购自美国 Cell Signaling 公司；二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)购自丹麦 Dako 公司；哈氏苏木素购自美国 Sigma 公司 ......