聂璐，白银磊，李聪然，游雪甫

    不动杆菌属(Acinetobacter spp.)是一类非发酵糖革兰阴性球杆菌，是近年来引起院内感染高发病率和死亡率的重要原因[1]。其中鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)临床分离率最高，可引起包括呼吸机相关性肺炎、皮肤和软组织感染、伤口感染、继发性脑膜炎、血行感染等各种感染[1-2]。氨基糖苷类及碳青霉烯类抗生素因其广谱、高效的特点，常用于临床治疗鲍曼不动杆菌感染[3-4]。但近年来，随着临床上广谱抗生素的大量使用，鲍曼不动杆菌呈现日益严峻的广泛耐药及多重耐药状况，受到各界关注[5-8]。基于此，药敏实验结果的准确性就显得尤为重要。

    目前对于不动杆菌菌种的鉴定及药敏检测，临床多运用 VITEK 2等高效、便捷的自动化分析仪器进行，进而辅助临床给出适当的给药治疗方案。对于菌种的鉴定，这类自动化分析仪器主要依靠菌株表型的差异进行，但常引起院内感染的鲍曼不动杆菌在表型上与醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoacelicus)、菌种3(Acinetobacter genomic species 3)和13TU(Acinetobacter genomic species 13TU)十分相似，通过表型鉴定难以区分，因而将它们合称为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体(Acinetobacter calcoaceticus-Acinetobacter baumannii complex)[9]。虽然各成员表型相近，但流行病学特征却有很大不同[10-11]。

    菌种的精确鉴定及药敏的准确测定，以对鲍曼不动杆菌临床分布及耐药情况准确认识为前提。基于此，本研究在运用 VITEK 2 对不动杆菌临床分离株进行初步菌种鉴定的基础上，对难以区分的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体菌株进一步进行 16S rRNA 序列分析，明确受试菌株的菌种类型。对确证的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体菌株，运用VITEK 2 及微稀释法进行药敏实验，对药敏实验结果进行分析。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株 受试菌株为实验室保藏的2006–2009年北京地区三甲医院收集的232 株不动杆菌。质控菌为大肠埃希菌(Escherichia coli)ATCC 25922、鲍曼不动杆菌 ATCC 19606。

    1.1.2 主要试剂 Taq DNA 聚合酶购自美国Promega公司；引物由美国 Invitrogen 生物工程公司合成；VITEK 2 革兰阴性细菌鉴定卡、药敏试验卡 AST-GN13 购自法国梅里埃公司；MH 琼脂、营养肉汤培养基购自美国 Difco公司；阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、厄他培南、亚胺培南购自中国食品药品检定研究院 ......