杨志英，邓志刚，伍健明，蓝伟红，张茂祥

    在癌症和饮食的相关性越来越强的今天，天然抗癌食物倍受重视，芹菜素作为食物提取物也被人们广泛关注。国内外试验研究表明，芹菜素具有广谱的抗瘤性[1]，包括前列腺癌[2]、乳腺癌[3]、肺癌[4]、宫颈癌[5]、结肠癌[6]等，然而目前芹菜素对中枢神经肿瘤——胶质瘤是否具有抑制作用，却鲜见国内外报道。本研究旨在通过对体外培养的U251人胶质瘤细胞进行实验，探讨芹菜素是否对胶质瘤细胞生长及p21、p53 表达有影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要实验材料

    1.1.1 细胞系 胶质瘤细胞株 U251 购于中科院上海细胞所。

    1.1.2 主要试剂 芹菜素购于美国 Sigma公司；二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶购于美国 Amresco公司；苯甲基硫酰氟(PMSF)购于美国 Promega公司；RPMI 1640 培养基、噻唑蓝(MTT)、乙二胺四乙酸(EDTA)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)购于Gibco公司；鼠单克隆抗人 p21和p53 抗体、辣根过氧化物酶标记的二抗购于美国 Santa Cruz公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及药物配置 胶质瘤 U251 细胞置于细胞培养箱中，RPMI 1640 培养液常规传代，取其生长对数期的细胞用于实验。100% DMSO 溶解芹菜素，配制成 40 mmol/L的浓缩液，于–20 ℃贮存备用。实验时加入完全培养基以配制浓度分别为20、40、80 μmol/L的芹菜素工作液，以完全培养基为对照组。

    1.2.2 MTT 法检测芹菜素对 U251 胶质瘤细胞增殖抑制率 消化液消化 U251 胶质瘤细胞，以全培养液终止并调整细胞密度至 1×105个/L，接种于96 孔板，置于培养箱内培养 24 h。吸去旧培养液，加入终浓度为0(对照组)、20、40、80 μmol/L的芹菜素工作液，分别培养 24、48及72 h。加入新鲜配制的MTT，培养 4 h，取出，弃上清，加入 DMSO，置于摇床振荡 10 min ......