耿洁，张磊，王斌，韩忠朝

    近年来随着干细胞研究的快速发展，干细胞逐渐在医学领域得到广泛应用。为适应临床使用的需要，各种干细胞制品制剂诸如新鲜制剂、冻存制剂、凝胶剂、组织工程细胞装置相继被开发。美国、加拿大、韩国的一些干细胞药物相继完成临床前研究进入临床试验阶段，这些都标志着干细胞从实验室技术向着药物的方向发展。干细胞向药物转化过程中的药学研究是药物安全性和有效性的基础，参照药物研发技术规范进行干细胞药物制剂稳定性的研究是非常重要的一部分[1]。

    药物稳定性是指药物在生产制备后，经过运输、储藏、周转直至临床应用前一系列过程中质量变化的程度。稳定性研究的目的在于查明一种药品是怎样作为时间函数和在各种不同环境因素影响下的不同表现，为药品辅料的筛选，生产工艺、生产条件、包装材料的选择和有效期的确定提供必不可少的科学依据。干细胞冻存制剂，是将一定浓度的干细胞悬液与细胞冻存保护液按比例混合配制，分装于适宜冷冻的内包装材料中，放于液氮中保存的制剂。作为一种不同于传统药物制剂的全新药物制剂形式，具有非常强的特殊性，更需要通过全面的稳定性研究来指导制剂的开发、制备、储存、运输、使用等[2]。

    我们开发的新药“注射用间充质干细胞(脐带)”已完成了临床前研究，进入临床试验审批阶段。在药学研究过程中，我们开发建立了一整套适用于间充质干细胞冻存制剂的质量检测方法及标准。

    本研究的目的是考察干细胞制剂在液氮冻存条件下物理、化学、生物学功能、微生物学等性质随时间变化的规律，为干细胞药品的生产、包装、贮存、运输条件和有效期的确定提供科学依据，以保障临床用药安全有效[3]。与传统药物制剂相比，干细胞药品有一个突出特点即制剂的有效成分是活细胞。因此在稳定性考察的过程中将重点考察保存环境对活细胞的生物学活性的影响，为保证制剂中活细胞的生物学活性长时间稳定，制剂的保存温度被设定在–196 ℃。这一保存温度也是首次应用于药物制剂开发中。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞与培养基、试剂 细胞制剂由本公司制备，含有 2×107个/袋的细胞悬液(含冻存保护剂)经超低温冻存制备得到的；胎牛血清购自兰州民海生物工程有限公司；DF12 培养基购自美国 Gibco公司；Human TNFRI Immuno Assay Kit 购自R & D公司；定量检测牛血清白蛋白(BSA)酶联免疫试剂盒购自无锡博生医用生物技术开发有限公司。

    1.1.2 仪器 FACS Calibur 型流式细胞仪购自美国 BD公司；SevenEasy 型 pH 计购自梅特勒-托利多公司；Model 680 酶标仪购自美国 Bio-Rad公司 ......