綦惠，杰永生，陈磊，陶建峰，江建，孙磊

    活动关节表面覆盖的透明软骨是一种低摩擦、富弹性、高渗透性的软骨组织，对维持关节的运动功能具有重要意义。由于软骨缺乏再生能力难以修复，外伤、肿瘤或骨性关节炎等原因造成的软骨损伤，最终将导致关节面不完整，临床上主要表现为顽固性疼痛，关节运动功能受限，需行关节融合术或关节置换术，较重的经济负担与较长的术后恢复期严重影响患者生活质量[1-4]。多年来，研究者和临床医生都在探索一种有效的修复方式。随着生物技术、材料科学、免疫组织化学和分子生物学的发展，应用自体软骨细胞移植技术(autologous chondrocyte implantation/transplantation，ACI 或 ACT)治疗软骨损伤已经成为有效的方法[5-7]。支架的研究是自体软骨细胞移植技术的重要课题。为了使支架保持良好的弹性、强度和稳定性，交联是必不可少的步骤之一[8-9]。我们试用两种交联剂对小牛真皮基质来源的支架进行交联，比较细胞毒性、生物相容性和间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)在其表面的贴附效果，为制备可用于 ACI 技术的新型支架提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物和细胞 新西兰大白兔 1 只，雌雄不限，体重 2.5 kg，合格证号 SCSK(京)2010-0010；SPF 级 SD 大鼠 5 只，雌雄不限，体重 210～310 g，合格证号 SCXK(京)2012-0001，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司。L929细胞由本单位细胞室提供。

    1.1.2 主要试剂 脱毛剂、乙酸、SDS、PBS、戊二醛、水溶性交联剂、苯酚等均为国产分析纯，购自北京化工厂；DMEM 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶均购自美国 Gibco 公司；二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑盐(MTT)、Ficoll 细胞分离液等均购自美国 Sigma 公司。

    1.1.3 仪器 C150 型细胞培养箱购自德国Binder 公司；CKX31 型倒置相差显微镜购自日本Olympus 公司；3-18KS 型低温高速离心机购自美国 Sigma 公司；AdVantage 实验型真空冷冻干燥机购自美国 Virtis 公司；680 型酶标仪购自美国Bio-Rad 公司；W4-1 型往复式真空泵购自上海益化真空设备有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 脱细胞真皮的制备 将新生小牛背部皮肤于脱毛剂中 4 ℃ 浸泡 72 h ......