戴剑漉，赵小峰，赫卫清，贾晓宇，李慧宁，王以光

    可利霉素又称必特螺旋霉素(BT)，是利用基因工程技术将 4''-异戊酰基转移酶基因(4''-isovaleryltransferase gene，ist)在螺旋霉素宿主菌中异源表达后的发酵产物[1-2]，其主组分为 4''-异戊酰螺旋霉素，此外，还含有少量 4''-酰基化的螺旋霉素，因此，BT 是一个多组分抗生素。BT 中的多种组分均具有抗菌活性，同时其在体内的代谢产物也具有抗菌活性。因此，采用微生物法进行其药代动力学研究，可以比较全面地评价其在体内的生物活性。然而由于微生物法受检定菌敏感度的限制，往往其检测灵敏度不理想[3]，且 BT 在体内组织渗透性强，导致其血浆浓度偏低，组织浓度高[4]。因此，建立较灵敏的微生物检测方法对于以体内活性为目标的 BT 药代动力学研究至关重要。BT 药品的含量测定方法系采用管碟法，参考《中国药典》[5]乙酰螺旋霉素微生物检定法，已经建立了 BT微生物检定法。但抗生素微生物检定法影响因素较多[6]，且血浆直接测定微生物方法的灵敏度受限。本文拟通过研究检定菌液浓度、培养基、缓冲液、血浆以及血浆处理等对 BT 检测的影响，提高微生物法测定 BT 的灵敏度，以满足该药药代动力学研究的需要。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试验材料 鱼胨、牛肉浸膏、牛肉蛋白胨、胰蛋白胨、酵母提取物为生化试剂；葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、无水碳酸钠、乙酸乙酯和异丙醇为分析纯；乙腈为色谱纯；特级胎牛血清由北京元亨圣马生物技术研究所提供；藤黄八叠球菌[CMCC(B) 28001]由中国食品药品检定研究院提供；可利霉素标准品(批号 167201207001)效价 926 μg/mg，由沈阳同联集团有限公司提供；健康人空白血浆由北京大学第一医院血库提供；健康人血浆取自经过伦理委员会审核批准的进行药代动力学试验的 2 名健康受试者。

    1.1.2 培养基

    1.1.2.1 LB 培养基(g/L) 胰蛋白胨 10.0，酵母提取物 5.0，NaCl 10.0，pH 7.0。

    1.1.2.2 抗生素检定培养基(g/L) ①鱼胨 6.0，葡萄糖 1.0，牛肉浸膏 1.5，酵母提取物 6.0；②牛肉蛋白胨 10.0，牛肉浸膏 5.0；③牛肉蛋白胨 5.0，牛肉浸膏 2.5；④牛肉蛋白胨 2.5，牛肉浸膏 1.25。上述培养基均含琼脂 1.2%，并用 1 mol/L NaOH溶液调节 pH 至 7.8～8.0 或 8.8～9.0 ......