肖增鸿，黄昭亮，林月霞，董斌，田素娟

    单克隆抗体被广泛应用于免疫学、药理学、细胞生物学、微生物学、临床疾病的预防、诊断和治疗及畜牧产品违禁限制药物的检测等。其生产方式主要有小鼠体内诱生腹水和杂交瘤细胞体外培养；前者生产成本低，是目前用于体外应用的主要生产方式。但无论哪种方式生产的单抗，均含有大量的杂蛋白，主要包括白蛋白、转铁蛋白、血清白蛋白、α-巨球蛋白、脂类蛋白以及其他宿主蛋白等，不能直接应用于体外。因此需对单抗进行后续的纯化，以达到使用要求。但目前尚没有一种方法能满足不同目的需要，尤其是在规模化制备单克隆抗体问题上显得更为突出。为了在大规模单克隆抗体的制备过程中，尽量减少经济成本与时间成本，对腹水型单抗纯化工艺进行了探讨[1-2]。

    1 材料与方法

    1.1 主要仪器和试剂

    全自动数码凝胶图像分析系统、垂直电泳仪由上海天能科技有限公司生产；Moderl 680 酶标仪为美国 Bio-Rad 公司产品；Ultrospec1100pro 紫外可见分光光度计为美国 Amersham Biosciences 公司产品；核酸蛋白检测仪为上海青浦沪西仪器厂产品；小型台式记录仪购自上海自动化仪表三厂；蛋白 G 亲和层析柱和 DEAE 阴离子层析柱为美国GE 公司产品；Sephadex G-25 由美国 Pharmacia公司生产；4-D10 抗氯霉素单抗(IgG1)腹水由本实验室制备；辣根过氧化物标记羊抗鼠 IgG 由精美公司分装；牛血清白蛋白 BSA 由瑞士 Roche公司分装；硫酸铵、正辛酸等为国产化学试剂。

    1.2 方法

    1.2.1 腹水预处理 –20 ℃ 保存的原腹水置于4 ℃ 解冻过夜，取出后 4 ℃ 条件下，10000×g 离心 10 min，取上清，4 ℃ 保存。

    1.2.2 两步硫酸铵沉淀法(AS 法) 取预处理腹水，用 0.02 mol/L pH 7.2 的磷酸盐缓冲液(PB)稀释 3 倍，再逐滴加入等量 pH 7.0 饱和(NH4)2SO4溶液，使其饱和度达到 50%，边加边搅拌，充分混匀后冰面静置 30 min。4 ℃ 条件下，10000×g 离心 10 min，取上清，将沉淀于 2 倍原腹水体积的 PB 复溶 ......