汤苏阳，李彦，闫俊灵，陈冲，李梁，丁红，原理

    寻找安全、有效、无毒、持久的组织代用品是修复重建外科亟待解决的问题。自 20 世纪 70年代开展自体脂肪移植以来，移植后脂肪的吸收、液化、坏死、感染、纤维囊性化和假性囊肿等不良反应，严重影响了脂肪移植的发展。提高脂肪移植成活率、降低脂肪移植后的并发症是自体脂肪移植技术的关键[1]。本研究通过自体脂肪干细胞(human adipose stem cells，hADSCs)体外扩增混合自体脂肪颗粒移植的方法进行面部美容充填和隆胸，6 ～24 个月后进行随访研究，比较单纯自体脂肪移植与 hADSC 体外扩增混合自体脂肪颗粒移植的效果，探讨体外扩增的 hADSC 是否能提高自体脂肪移植的成活率、降低脂肪移植后并发症且有较好的美容成形效果。

    1 材料与方法

    1.1 对象与材料

    1.1.1 研究对象 实验组纳入对象 50 例，女性46 例，男性 4 例，年龄 23～60 岁，健康状况良好，无其他系统性疾病，术前均签订知情同意书，并经武警总医院伦理委员会通过。实验于 2010年1月–2012年 1月在本科室完成。

    1.1.2 主要试剂和仪器 α-MEM 无血清培养基、I 型胶原酶和胰蛋白酶购自美国 Sigma 公司；小鼠抗人 CD14-PE、CD29-PE、CD31-PE、CD34-PE、CD44-PE、CD45-FITC、CD73-PE、HLA-ABC-FITC、HLA-DR-FITC 购自美国 Biosciences 公司；秋水仙素购自上海瑞朗商贸有限公司；倒置显微镜及成像系统购自日本 Olympus 公司。

    1.2 实验方法

    1.2.1 自体脂肪干细胞的体外分离培养 患者下腹部抽取 15～20 ml 自体脂肪颗粒，离心 2 次，取脂肪层，加 0.075% I 型胶原酶于 37 ℃ 消化60 min，1500 r/min 离心 15 min，去除上层脂肪组织，沉淀用生理盐水重悬，70 μm 细胞筛过滤，去除残余结缔组织，再次以 1500 r/min 离心 5 min，加入红细胞裂解液，裂解 5 min，用生理盐水清洗2 遍，计数，用 α-MEM 培养基以 106个/ml 铺于培养皿中。记为 P0 代，待细胞长满后，0.05% 胰蛋白酶消化，按照 1∶6 的比例传代。

    1.2.2 自体脂肪干细胞免疫表型鉴定 取第 3 代自体脂肪干细胞 ......