解晓露，魏东，王国治，黄长江

    宫颈癌是一种在全世界范围内死亡率仅次于乳腺癌的女性癌症，并且相对来说常见于年轻女性，是最常见的恶性肿瘤之一。在发展中国家妇女中，其发病率居第一位。70% 的宫颈癌是由高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)16 型和 18 型引起的，其中 16 型与宫颈癌关系最为密切[1]。此外，研究发现 HPV16 型也与人类其他癌症有关，如喉癌、食管癌、骨髓癌等[2]。最近的研究显示，HPV16 型是中国西南部最流行的高危血清感染型之一[3]。为了防治 HPV16 的感染从而有效控制相关肿瘤的发生，高效 HPV16 疫苗的研制日益成为研究热点。目前，世界上有两种 HPV VLPs 疫苗上市，均采用真核表达系统，分别是Merck 的表达于酿酒酵母表达系统的 Gardasil[4]和GSK 的源于昆虫细胞表达系统的 Cervarix[5]，这两种疫苗的制备工艺复杂，价格昂贵，在发展中国家难以普及，而发展中国家又是宫颈癌患病率和死亡率高发的国家，所以研制出价格低廉的宫颈癌疫苗迫在眉睫。本研究在大肠杆菌表达系统中，高效制备 HPV16L1 VLPs，用以制备经济的 HPV16 预防性疫苗。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂和仪器 限制型内切酶、T4 DNA连接酶、DNA 凝胶回收试剂盒、抽提质粒试剂盒均购自日本 Takara 公司；蛋白分子量标记购自美国 Thermo 公司；HPV16L1 单克隆抗体购自美国GeneTex 公司；羊抗鼠 IgG 购自中杉金桥公司。AKTA 层析系统和层析介质均为美国 GE 公司产品；透射电镜 H-7650 为日本日立公司产品。

    1.1.2 载体和感受态细胞 PET30a 原核表达载体、PMD-18T 克隆载体和大肠杆菌(E.coil)DH5α、Rosetta(DE3)均为本室保存。

    1.2 方法

    1.2.1 重组非融合表达质粒 PET30a-HPV16L1的构建

    1.2.1.2 HPV16L1 的扩增和表达质粒 PET30a-HPV16L1 的构建 以宫颈癌患者阴道分泌物中提取的 DNA 为模板，用所设计的引物进行 HPV16L1基因的 PCR 扩增 ......