卢海涛，牛超，倪茂巍，朱忠欣，丛维涛，金利泰

    尿液是血液经肾小球滤过，肾小管和集合管重吸收、排泻及分泌产生的终末代谢产物，其组成与性状可反映整个泌尿系统的状况。尤其是尿液中蛋白质种类和数量的变化携带有泌尿系统疾病发生、发展及预后的各种信息，而尿液蛋白质组学是诠释尿液蛋白所携带信息的最有效方法之一，而且此研究可以发现体内很多疾病的生物标志，例如膀胱癌和肾炎等。然而尿液中的盐浓度高，代谢废物多，还有很多低浓度的复合物，复杂的组成成分大大增加了尿液蛋白质组学的研究难度[1]。因此，尿液样品的前期处理在尿液蛋白质组学分析和疾病分析过程中是一个相当重要的环节。本文着重阐述近年来国内外尿液蛋白质组学样品的前期处理方法以及各方法的比较。

    常用的尿液样品前期处理技术主要包括两种：非浓缩型与浓缩型尿液样品处理。用考马斯亮蓝结合法、Folin 法及凝胶电泳技术检测这两种方法处理的尿液样品，并且利用临床上的肾活检符合率指标来检验其准确度。其中非浓缩尿液样品肾活检符合率约 90.0%；浓缩型尿液样品肾活检符合率约 99.0%。

    1 非浓缩型尿液蛋白质组学的样品处理

    尿蛋白成分可用于反映肾小球及肾小管损伤的程度。从近几年研究来看，临床检验主要运用肾组织穿刺活检和非浓缩型处理尿液后蛋白检测两种技术。肾组织穿刺活检虽是准确判断肾脏病变的方法，但其创伤性和高风险性限制了其应用，不易被患者接受。而非浓缩型处理尿液后蛋白检测方法因其对患者身体无任何损伤、取材方便、报告快速准确，而且比较全面、客观反映尿中蛋白质的整体情况等优点而被广泛应用，其方法步骤主要是非浓缩处理尿液后进行凝胶电泳检测。姜傥[2]用此方法检测肾炎患者尿液，用磺柳酸作蛋白定性，生理盐水予以稀释后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)，将尿液中的蛋白质在电场作用下按照分子量大小进行分离。分子量 70 kD 为非选择性肾小球性蛋白尿，主要用来反映肾小球滤过功能障碍。文献[1]报道，肾组织活检与 SDS-AGE 尿蛋白电泳技术检测的结果进行对比，其符合率高达 94.4%。

    2 浓缩型尿液蛋白质组学的样品处理

    按照浓缩法处理尿液后的效果可以分为低浓缩型与高浓缩型两种方法[3]，这两种方法各有其特点(表1)。低浓缩型方法是指对尿样进行相对较低程度的处理或经过低浓缩程度设备的过程；高浓缩型则是对尿样进行相当高的浓缩过程，进一步减少尿中微量蛋白的丢失，更加适用于尿样临床肾病检验。这两种方法具有纯化浓缩性能优越、准确性好、操作条件温和、尿中微量蛋白丢失少和肾活检符合率高等优点 ......