杜郁，贾晓健，王丽，王丽非，姜华军，杨帆，司书毅，杨媛，洪斌

    人载脂蛋白A-I表达上调剂的发现与活性研究

    杜郁，贾晓健，王丽，王丽非，姜华军，杨帆，司书毅，杨媛，洪斌

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室(杜郁、贾晓健、王丽、王丽非、姜华军、杨帆、杨媛、洪斌)，国家新药(微生物)筛选实验室(司书毅)

    筛选上调人载脂蛋白 A-I(ApoA-I)基因表达的新型活性化合物，并在表达和功能水平对其作用进行研究。

    利用人 ApoA-I 基因表达上调剂筛选模型对化合物库进行筛选；对发现的活性化合物在 ApoA-I 启动子水平进行量效关系研究；利用实时荧光定量 RT-PCR 检测 ApoA-I mRNA 的表达水平；利用 Western blot、ELISA 和流式细胞技术检测 ApoA-I 的蛋白表达；利用胆固醇流出试验检测 ApoA-I 介导的巨噬细胞胆固醇外流的情况。

    从 20000 样次化合物筛选中得到活性化合物 5238B-69，在一定浓度范围内存在转录调控活性的量-效关系，当化合物浓度为 0.30 μg/ml 时，上调 ApoA-I 表达活性达到最高值(408%)，EC50为 0.01 μg/ml。5238B-69 能显著上调 HepG2 细胞中 ApoA-I mRNA 的水平；同时，Western blot 结果显示 5238B-69 能增加 HepG2 细胞 ApoA-I 蛋白的表达。ELISA 结果显示，与对照相比，5238B-69 作用 48 h 时，胞外 ApoA-I 水平增加了 48%，流式细胞检测表明，5238B-69 作用 24 h 后，胞内 ApoA-I 蛋白水平增加了 21.4%。功能分析试验显示，5238B-69 作用 HepG2 细胞上调生成的 ApoA-I，能促进巨噬细胞RAW 264.7 内 [3H] 标记的胆固醇的流出。

    得到一个具有上调 ApoA-I 表达的活性化合物，在提高 ApoA-I 表达水平和生物学功能方面均有明显的效果。

    载脂蛋白 A-I； 基因表达调控； 动脉粥样硬化； 转录水平

    血浆高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)水平偏低是心血管病的独立危险因素，在过去的三十年中，国内外的研究人员一直寻求通过升高血浆中高密度脂蛋白胆固醇的水平来降低动脉粥样硬化性心血管病的发生。随着对 HDL 生物学特性认识的不断深入 ......