朱大强，陈淑珍

    TRAIL和EGFR配体寡肽与力达霉素辅基蛋白融合蛋白制备过程的优化

    朱大强，陈淑珍

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室

    对以包涵体形式表达的 TRAIL 和 EGFR 配体寡肽与力达霉素辅基蛋白融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 的制备过程进行优化。

    对大肠杆菌原核表达 Ec-LDP-TRAIL 目的蛋白的温度、诱导物浓度、起始菌体密度及时间等条件进行优化；在Ni2+亲和层析纯化蛋白过程中对样品预处理以及纯化缓冲液成分进行优化；对纯化后蛋白的分步透析复性过程进行一系列优化，并通过基于 ELISA 的结合活性实验分析 Ec-LDP-TRAIL 与肿瘤细胞的结合能力。

    经过工艺优化后，纯化后的融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 纯度达 95% 以上，复性后 LB 培养基活性蛋白收率约为 2.2 mg/L，与初始复性条件相比提高近 2 倍。复性后融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 显示出能够与人表皮癌 A431 和人大细胞肺癌 H460 细胞的结合活性。

    融合蛋白 Ec-LDP-TRAIL 制备过程的优化为后续研发和生产奠定了实验基础，同时也为其他以包涵体形式表达的基于 TRAIL 的抗肿瘤蛋白药物的制备提供借鉴。

    包涵体； 重组融合蛋白质类； 蛋白质复性； 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体

    肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)是机体自身合成的一种细胞因子，主要通过细胞外凋亡途径诱导细胞凋亡[1]，但在后期也有线粒体通路的参与。TRAIL 信号传导通路是指以 TRAIL 为配体，通过与死亡受体 DR4/DR5 结合而启动凋亡信号，最终诱导细胞凋亡[2-3]。由于 TRAIL 可选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无毒性，是一种很有前景的抗癌药物。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是具有酪氨酸激酶活性的细胞膜表面受体，EGFR 高表达与患者的预后不良、易复发及耐药关系密切。目前，针对 EGFR 分子靶向治疗已广泛应用于各类肿瘤的治疗，靶向EGFR 的抗体已经成为有效的抗肿瘤药物。已有研究表明，对 EGFR 通路的抑制能够增强 TRAIL 的促细胞凋亡作用，也在一定程度上克服肿瘤细胞对于 TRAIL 的耐药性[4-6]。因此，可采用 EGFR 配体寡肽(EC)的导向作用拮抗 EGFR 介导的信号传导通路 ......