鞠瑞，陈晨，郭磊，李娟，叶菜英，张德昌

    羧胺三唑抑制肿瘤细胞诱导的巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α的释放

    鞠瑞，陈晨，郭磊，李娟，叶菜英，张德昌

    100005 北京，中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所药理学系

    观察体外培养的肿瘤细胞对巨噬细胞炎症因子——肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的诱导作用；初步探索羧胺三唑(CAI)对肿瘤诱导的巨噬细胞中 TNF-α 释放的影响。

    利用 transwell 装置，建立 Lewis 肺癌细胞(LLC)与 RAW264.7 巨噬细胞共培养体系，采用荧光定量 PCR 方法和 ELISA 方法分别分析 RAW264.7 中 TNF-α 的表达和释放；用 LLC 条件培养基(LCM)诱导 RAW264.7，同时给予 CAI 处理，采用 CCK-8 方法分析 LCM 和 CAI 对 RAW264.7 活力的影响，采用 ELISA 方法分析 CAI 对诱导后的 RAW264.7 中 TNF-α 释放的影响。

    与 LLC 共培养 24 h 可显著增加RAW264.7 中 TNF-α 相对表达量[单独培养 vs 共培养，(1.00 ± 0.12)vs(2.23 ± 0.17)，1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞系 RAW264.7 巨噬细胞购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。Lewis 肺癌细胞(LLC)购自中国科学院上海生科院细胞资源中心。

    1.1.2 试剂 DMEM 高糖培养基、谷氨酰胺、青霉素和链霉素购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心；胎牛血清购自美国 Gibco 公司；CAI 由中国医学科学院药物研究所提供；CCK-8 试剂购自日本同仁化学研究所；TNF-α ELISA 试剂盒购自上海依科赛生物制品有限公司；mRNA 提取试剂盒购自北京百泰克试剂公司；Oligo(dT)18和 M-MLV 反转录酶购自美国 Promega 公司；SYBR Green I 荧光定量 PCR 试剂盒购自杭州博日科技有限公司；TNF 和 β-actin 引物购自上海基康生物技术有限公司。

    1.1.3 装置和仪器 Transwell(0.4 μm)、0.22 μm 滤器购自美国 Millipore 公司；酶标仪 Synergy 4 为美国基因公司产品；荧光定量 PCR 仪 IQ 5 为美国 Bio-Rad 公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 RAW264.7 细胞和 LLC 细胞培养 RAW264.7 和 LLC 细胞用 DMEM 高糖培养基(加入 10% 胎牛血清、1% 谷氨酰胺、50 mg/ml 青霉素和100 mg/ml 链霉素)在 37 ℃、5% CO2环境中培养 ......